王瀚民，马 宁，杨尚军*，白少岩*

（1. 济南大学 山东省医学科学院 医学与生命科学学院，山东 济南 250200；2.山东省医学科学院 药物研究所国家卫生部生物技术药物重点实验室 山东省罕少见病重点实验室，山东 济南 250062）

马蹄香（Saruma henryiOliv.）别名高脚细辛、冷水丹，为马兜铃科马蹄香属马蹄香的多年生直立草本植物，是马兜铃科中国特有单种属。其根状茎粗壮，有多数细长须根，夏秋采挖，阴干酒炒研粉备用，鲜叶外用治疮疡。主产自陕西、甘肃、河南、江西、湖北、四川及贵州等省，秦巴山区资源丰富[1-2]，生长于海拔600～1600 m的路边、沟边、山野、荒地，尚未由人工引种栽培。中医文献记载：味辛、苦，有小毒，具温中散寒、理气镇痛之功效。现代研究表明，其根及根茎药用，有抗肿瘤、抗菌、抗病毒等活性[3-5]。马蹄香的化学成分主要有马兜铃内酰胺、马兜铃酸、生物碱、木脂素和黄酮类化合物。为了更加全面地了解马蹄香生物活性的物质基础，本实验对其化学成分继续进行研究，从中分离得到9个化合物，分别鉴定为细辛脂素(1)、金粟兰内酯(2)、shizukanolide H(3)、吲哚-3-甲酸甲酯(4)、丁二酸(5)、异嗪皮啶(6)、银线草醇F(7)、β-谷甾醇(8)、胡萝卜苷(9)，其中化合物1，2，3，4，6，7均为首次从马蹄香中分离得到。

1 仪器与材料

1.1 仪器

NEXUS 870型红外光谱仪（美国Thermo Nicolet）；X6型显微熔点测定仪（上海诺顶）；R-200型旋转蒸发仪（瑞士Buchi）；SHB-III循环水式多用真空泵（郑州长城）；Acance 6002型核磁共振仪（德国Bruker）；Trap VL型质谱仪（美国Agilent）；1100型高效液相质谱联用仪（美国Agilent）；U-3000型高效液相色谱仪（美国ThermoFisher）；真空干燥箱（上海精宏）；ODS（50 μm，YMC公司），HP-20大孔吸附树脂（廊坊淼阳化工）；LH-20 型羟丙基葡聚糖凝胶（Sephadex LH-20，上海拜利）；柱层层析硅胶，薄层层析硅胶G，薄层层析硅胶GF254（青岛海洋化工厂）。

1.2 试剂

马蹄香采自陕西咸阳，经北京大学药学院尚明英教授鉴定为马兜铃科马蹄香属马蹄香Saruma henryiOliv.的干燥全草。所用试剂为分析纯和色谱纯。

2 提取与分离

取干燥的马蹄香全草16 kg，粉碎，分别用95 %乙醇、75 %乙醇提取，提取液合并，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，得到石油醚萃取部位350.10 g、乙酸乙酯萃取部位130.10 g。

石油醚萃取部位（Fr. 1）经硅胶柱色谱，以石油醚-乙酸乙酯溶剂系统梯度洗脱，得到组分：Fr. 1-1～Fr. 1-7，再经过硅胶柱色谱、重结晶分离纯化及高效液相制备技术，得化合物1（16.5 mg）、2（70.0 mg）、8（60.1 mg）。乙酸乙酯萃取部位（Fr. 2）经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇溶剂系统梯度洗脱，得到组分：Fr. 2-1～Fr. 2-5，再经过硅胶柱色谱、重结晶分离纯化及高效液相制备技术，得化合物3（38.9 mg）、4（10.1 mg）、5（7.3 mg）、6（20.5 mg）、7（500.3 mg）、9（21.1 mg）。

3 结构鉴定

化合物1 白色粉末。C20H18O6，ESI-MSm/z376.8[M+Na]+，推测化合物分子量为354。1H-NMR（CDCl3，600 MHz）δ：6.79～6.89（6H，m，H-2'，H-2''，H-5'，H-5''，H-6'，H-6''），5.98（2H，s，-OCH2O-），5.97（2H，s，-OCH2O-），4.85（1H，d，J=5.2 Hz，H-6），4.42（1H，d，J=7.1 Hz，H-2），4.12（1H，d，J=9.5 Hz，H-8β），3.86（2H，m，H-8α，H-4α），3.33（2H，m，H-5，H-4β）， 2.89（1H，m，H-1）；13C-NMR（CDCl3，150 MHz）δ：148.2（C-3''），147.8 （C-4'），147.4（C-4''），146.8（C-3'），135.3（C-1''），132.4（C-1'），119.8 （C-6''），118.9（C-6'），108.4（C-5'，5''），106.8（C-2''），106.6（C-2'）， 101.3（-OCH2O-），101.2（-OCH2O-），87.9（C-6），82.2（C-2），71.1（C-4）， 69.9（C-8），54.8（C-5），50.4（C-1）。以上数据与文献[6]基本一致，该化合物鉴定为细辛脂素。

化合物2 白色粉末。C17H20O4，ESI-MSm/z288.8[M+H]+，推测化合物分子量为288。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：6.31（1H，s，H-9），2.36（1H， m，H-5），2.27，2.75（各1H，m，H-6），2.08（3H，s，CH3C=O），1.87（3H，s，H3-13），1.80（1H，m，H-4），1.58（1H，m，H-1），1.35（1H，m，H-3），0.93（3H，s，H3-14），0.85，0.98（各1H，m，H-2）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：173.2（CH3C=O），173.1（C-12），151.1（C-8），150.6（C-7），123.2（C-9），121.9（C-11），67.2（C-15），61.6（C-5），44.4 （C-4），43.3（C-10），28.3（C-1）， 23.6（C-6）， 23.3（C-3）， 21.3（CH3C=O）， 20.9（C-14），17.5（C-2），8.5（C-13）。以上数据与文献[7]基本一致，该化合物鉴定为金粟兰内酯C。

化合物3 淡黄色粉末。E S I-M Sm/z305.1[M+H]+，327.1[M+Na]+，推测化合物分子量为304。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：6.43（1H，s，H-9），4.34（2H，s，H-13），4.22（2H，s，H-15），3.00（1H，d，J=17.2 Hz，H-6α）， 2.45（1H，t，J=15.6 Hz，H-6β），2.28（1H，t，J=12.8 Hz，H-5），2.07（3H， s，H-2'），1.86～1.76（1H，m，H-4），1.58（1H，d，J=7.7 Hz，H-1），1.34（1H，d，J=3.0 Hz，H-3），0.98（1H，s，H-2β），0.94（3H，s，H-14），0.88 ～ 0.81（1H，m，H-2α）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：173.1（C-1'），171.7（C-12），153.0（C-8），150.9（C-7），125.7（C-9），124.1（C-11），67.3（C-15），61.7（C-5），54.9（C-13），44.3（C-4），43.2（C-10），28.3（C-1），23.9（C-6），23.3（C-3），21.3（C-2'），20.9（C-14），17.5（C-2）。以上数据与文献[8]基本一致，该化合物鉴定为shizukanolide H。

化合物4 白色粉末。C10H9NO2，ESI-MSm/z176.1[M+H]+，推测化合物分子量为175。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：8.05（1H，d，J=7.1 Hz，H-4）， 7.95（1H，s，H-2），7.44（1H，d，J=7.4 Hz，H-7），7.19（2H，m，H-5, 6），3.88（3H，s，H-9）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：168.0（C-8），138.3 （C-7a）， 133.4（C-2），127.4（C-3a），123.9（C-6），122.7（C-5），122.0（C-4），113.1（C-7），108.4（C-3），51.5（C-9）。以上数据与文献[9]基本一致，该化合物鉴定为吲哚-3-甲酸甲酯。

化合物5 白色针晶。C4H6O4，ESI-MSm/z135.9 [M+H2O]+，推测化合物分子量为118。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：2.51（4H，s，H-2, 3）；13C-NMR （CD3OD，150 MHz）δ：176.3（C=O），30.0（C-2, 3）。以上数据与文献[10]基本一致，该化合物鉴定为丁二酸

化合物6 淡黄色针状结晶。C11H10O5，ESI-MSm/z222.8[M+H]+，推测化合物分子质量为222。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.87（1H，d，J=9.4 Hz， H-4），6.93（1H，s，H-5），6.25（1H，d，J=9.4 Hz，H-3），3.97（3H，s，8-OCH3），3.92（3H，s，6-OCH3）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：163.6（C-2），147.5（C-6），146.7（C-4），145.8（C-9），144.8（C-7），136.3（C-8）， 113.0（C-3），112.3（C-10），105.1（C-5），61.8（C8-OCH3），57.0（C6-OCH3）。以上数据与文献[11]基本一致，该化合物鉴定为异嗪皮啶。

化合物7 白色粉末。C40H44O13，ESI-MSm/z755.4 [M+Na]+，推测化合物分子质量为732。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：5.91（1H，s，H-b），5.00（1H， d，J=17.0 Hz，H-d），4.92（1H，d，J=12.7 Hz，H-13'）， 4.68（1H，d，J=8.4 Hz，H-15'），4.66（1H，d，J=7.3 Hz，H-13'），4.39（1H，d，J=17.0 Hz，H-d），3.91（1H，d，J=3.1 Hz，H-6），3.89（1H，s，H-9），3.71（3H，s，-OCH3）， 3.49（2H，d，J=11.6 Hz，H-15'），2.91（1H，m，H-g），2.87（1H，m，H-h）， 2.79（1H，d，J=7.1 Hz，H-15α），2.76（1H，dt，J=12.6, 4.4 Hz，H-h），2.72 （1H，dd，J=12.2，5.7 Hz，H-6'β），2.64（1H，dd，J=6.9，4.0 Hz，H-6'α）， 2.61（1H，dd，J=14.2, 5.6 Hz，H-g），2.53（1H，m，H-15β），2.12（3H，s， H-e），2.04（1H，m，H-1），1.89（1H，s，H-5'），1.88（3H，s，H-13），1.86（1H，s，H-9'），1.84（1H，dd，J=9.1, 3.8 Hz，H-3），1.59（1H，td，J=8.2， 4.2 Hz，H-1'），1.37（1H，td，J=8.8,3.4 Hz，H-3'），1.29（1H，dd，J=9.0, 4.0 Hz，H-2'β），1.01（1H，s，H-2α），0.99（3H，s，H-14），0.79（3H，s，H-14'）， 0.70（1H，td，J=8.8, 5.8 Hz，H-2'α），0.33（1H，dd，J=7.3, 4.0 Hz，H-2β）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ： 200.6（C-8），174.7（C-7'），172.3（C-i）， 172.0（C-f），171.9（C-12'），170.7（C-12），166.5（C-a），153.8（C-c）， 147.0（C-11），142.7（C-4），132.8（C-5），131.2（C-7），123.4（C-11'）， 113.0（C-b），93.8（C-8'），79.7（C-9），77.4（C-4'），71.5（C-15'），65.8 （C-d），61.3（C-5'），55.3（C-13'），55.0（C-9'），52.7（-OCH3），51.1（C-10），44.9（C-10'）， 41.6（C-6），29.3（Cg），29.0（C-h），27.5（C-3'）， 26.4（C-1），26.1（C-1'），26.0（C-14'），25.5（C-15），25.0（C-3），24.8 （C-6'），20.0（C-13），16.2（C-2），15.7（C-14），15.7 （C-e），11.7（C-2'）。以上数据与文献[12]基本一致，该化合物鉴定为银线草醇F。

化合物 9 白色粉末。 易溶于吡啶，Liebermann-Burchard 反应呈阳性，与胡萝卜苷对照品TLC的多种展开剂系统下Rf值一致，与胡萝卜苷标准品混合后熔点不下降，该化合物鉴定为胡萝卜苷。

4 结论

本实验通过对马蹄香全草95 %乙醇和75 %乙醇提取物的石油醚、乙酸乙酯部位进行分离纯化，共得到9个化合物，分别是木脂素类1个：化合物1；乌药烷型倍半萜类3个：化合物2，3，7；生物碱类1个：化合物4；香豆素类1个：化合物6；有机酸类1个：化合物5；甾醇及其苷类2个：化合物8，9。

其中化合物1，2，3，4，6，7均为首次从马蹄香中分离得到，并且乌药烷型倍半萜类化合物系首次从该植物中分离得到。

致谢

感谢山东省医学科学院医药卫生科技创新工程项目经费支持。