陈曦娟

(新蔡县食品药品检验所，河南 驻马店 463500)

糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损，或两者兼有引起。长期存在的高血糖，会引起各种组织功能障碍，特别是眼、肾、心脏、血管、神经等[1-2]。盐酸二甲双胍临床上常用于单纯饮食控制不满意的Ⅱ型糖尿病，尤其是肥胖和伴高胰岛素者，盐酸二甲双胍不仅有降低血糖的作用，还可能有减轻体重和高胰岛素血症的效果，具极高的研究价值[3-5]。《中国药典》(2015年版)规定，盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍含量测定的方法为紫外-可见分光光度法[6]，其灵敏度与准确度与高效液相色谱法相比均有一定差距。本文对盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍含量采用高效液相色谱法测定，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

高效液相色谱仪为美国Waterse2695系统，检测器为Waters 2998二极管阵列检测器，电子天平为德国赛多利斯型号CPA225D，超声波清洗器型号为SK2510HP(上海科导超声仪器有限公司)，电热鼓风干燥箱型号为DHG9245A(上海一恒科学仪器有限公司)酸度计型号为FE20(梅特勒-托利多公司)，紫外-可见分光光度计型号为UV2550(日本岛津公司)，甲醇为色谱纯(DiKMAPURE)，磷酸二氢钠为分析纯(天津市恒兴化学试剂制造有限公司)，磷酸为分析纯(洛阳昊华化学试剂有限公司)，水为超纯水。盐酸二甲双胍对照品(中国食品药品检定研究院，批号：100664-201604)；盐酸二甲双胍片(上海上药信谊药厂有限公司，规格；250 mg×48片/盒，批号：48161104、48170424、48170506)。

1.2 方法

1.2.1 设置色谱分析条件

应用SYMMETRY C18液相色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为0.01 mol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调pH至3.5)-甲醇(85:15),检测波长为233 nm，流速为1.0 mL/min；柱温30 ℃；进样量20 μL。按二甲双胍峰对理论塔板数正确计算，需在2 000及以上。

1.2.2 检测溶液制备

(1)对照品溶液制备：精密称取在105 ℃干燥 2 h后置干燥器中放冷的盐酸二甲双胍约100 mg，置于100 mL的容量瓶中，加水20 mL，超声震荡5 min，使药物充分溶解，加水稀释至刻度，充分摇允，制成每毫升中含对照品1 mg的对照品溶液，备用；(2)供试品溶液制备：分别取盐酸二甲双胍片20片，精密称定，分别研细，精密称取适量(约相当于盐酸二甲双胍100 mg)，置于100 mL容量瓶中，加入水30 mL，超声震荡5 min，使药物充分溶解，用水稀释至刻度，充分摇匀。过滤，弃去初滤液20 mL，取续滤液，精密吸取续滤液1 mL，置于50 mL的容量瓶中，用水稀释至刻度，充分摇允，即得供试品溶液，备用。

1.2.3 测定方法

吸取对照品、供试品溶液各20 μL进行分析，依据色谱峰面积，应用外标法对样品含量进行计算。

2 结 果

2.1 标准曲线

精密吸取待测盐酸二甲双胍对照品溶液1 mL，置于50 mL的容量瓶中，用水稀释定容制成浓度为20 μg/mL的标准贮备液(1)；精密吸取待测盐酸二甲双胍对照品溶液5 mL，置于50 mL的容量瓶中，用水稀释定容制成浓度为100 μg/mL的标准贮备液(2)。分别精密吸取标准贮备液(1)1.0，2.0，5.0 ,8.0，10.0 mL，置于10 mL容量瓶中；分别精密吸取标准贮备液(2)1.0，2.0，5.0 ,8.0，10.0 mL，置于10 mL容量瓶中；用水缓慢稀释至相应刻度，按照“1.2.1”的色谱条件进样，以峰面积(Y)作为纵坐标，以浓度(X)作为横坐标，进行回归分析。可得回归方程为：Y=70 876X+1 468.6(r=0.999 8)；结果表明盐酸二甲双胍线性范围2.75～89.66 μg/mL。

2.2 精密度试验

精密吸取“2.1”项下的标准储备液(1)，准确进样20 μL，连续进样6次，测定峰面积，盐酸二甲双胍的RSD为0.3%，色谱图见图1。

图1盐酸二甲双胍对照品的HPLC色谱图

2.3 重复性实验

取批号为48161104的样品，按照“1.2.2”中方法制备供试品6份，按照“1.2.1”色谱条件准确进样20 μL，根据样品的色谱图峰面积计算相对标准偏差RSD为0.9%。显示本组方法具有良好的重复性。

2.4 稳定性实验

分别在0、2、4、8、12、24、48 h取批号为48161104的样品制成的供试品溶液和“2.1”中制成的标准储备液(1)；进样20 μL，根据所得的色谱图的峰面积计算RSD，结果表明：标准储备液(1)的RSD值为0.7%；供试品组的RSD值为0.9%。对照品溶液和供试品溶液在48 h内稳定。

2.5 加样回收率实验

精密称取盐酸二甲双胍对照品2.21、3.57、5.23、6.76、8.04、10.07 mg加入批号为48161104的样品制成的供试品溶液(配制方法参照1.2.2步骤，浓度约为20 μg/mL)，根据“1.2.1”中的色谱条件进样，根据峰面积进行计算，可得回收率分别为100.5%、100.3%、99.8%、100.1%、99.9%、100.1%。平均回收率为100.1%，RSD为0.26%。符合药典规定。结果见表1。

表1 回收率实验结果

2.6 含量测定

根据“1.2.1、1.2.2”项下步骤进行操作分别测定3批盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍含量；并按照《中国药典》(2015年版)规定，用紫外-可见分光光度法测定该3批盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍的含量。将二者结果进行比较，检测结果见表2。

表2 盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍标示量百分含量测定结果(%)

3 讨 论

目前，《中国药典》(2015年版)只有在盐酸二甲双胍肠溶胶囊的含量测定中采用高效液相法，其他盐酸二甲双胍制剂含量测定采用滴定法、紫外-可见分光光度法进行测定[6]。本文中所采用的色谱条件，流动相简单，精密度好、稳定性高，重现性好。对二甲双胍的测定与《中国药典》(2015年版)比较结果准确度高，精密度好，重复性和相关性都符合相关规定。高效液相色谱法所测定的结果更能体现药物的真实含量。建议用此种方法来测定盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍的含量。