樊琼

摘要：新城疫是养禽生产中的常见病、多发病，对鸡群的影响比较大，传统上我们一般通过临床表现和剖检变化对其做出诊断，近年来随着科技的不断发展，实时荧光定量PCR技术也为大家所熟知和掌握，本文就一例采用实时荧光定量PCR技术诊断新城疫的过程进行介绍。

关键词：新城疫；PCR；诊断

新城疫（ND）又称亚洲鸡瘟，主要侵害鸡、火鸡、野禽及观赏鸟类，由鸡新城疫病毒（NDV）引起，死亡率高，对养鸡业危害严重。近日在锦州某一蛋鸡规模场，50日龄的鸡群突然出现呼吸困难，采食量下降，个别出现运动失调等临床症状。对其中3只死亡鸡只进行了剖检，发现眼结膜出血；脾脏萎缩，是正常脾的1/2大小；卵泡变形、出血、菜花样变；腺胃乳头靠近腺胃肌胃相接处出血，肠道滤泡肿胀，肠道黏膜有密集出血斑；盲肠扁桃体萎缩出血；泄殖腔有輕度出血。采集3只病死鸡的组织病料，对同群未发病的2只鸡采集了喉、肛拭子，用于新城疫病原学检测。

1材料与方法

1.1病料

无菌采集新鲜脏器（喉头、气管、心、肝、脾、肺、肾、小肠）各2g并加入5mL PBS（磷酸缓冲溶液）于研磨器中充分研磨，离心取上清液转入无菌离心管中保存备用。喉、肛拭子可以直接用于实验。

1.2主要仪器

Ⅱ级生物安全柜（1300系列A2型，Thermo Scientific）；荧光定量PCR仪（105，美国伯乐）；台式冷冻高速离心机（Sorvall Stratos，Thermo）。

1.3实验方法

按照离心柱式提取法提取核酸，严格按照凯杰生物工程（深圳）有限公司新城疫病毒荧光RT-PCR检测试剂盒的说明书进行操作。加入制备的RNA溶液10uL，反应体系25uL。……