赵林静 张振超 刘世国

【摘要】目的：分析河南省家畜、家禽和寵物中弓形虫感染状况。方法：随机提取河南省各地动物样品，酚氯仿法提取总DNA，弓形虫529 重复序列为靶基因，巢式PCR检测样品目的基因。结果：各种动物弓形虫阳性率不同，总阳性率是14.31%。结论：猫感染率最高，猪和鸽感染率最低。

【关键词】弓形虫；家畜；家禽；宠物；巢式PCR

【中图分类号】R249 【文献标识码】B 【文章编号】2095-6851（2018）10-168-01

了解食用肉类中弓形虫感染情况对弓形虫预防很有意义。弓形虫检测包括血清学、形态学、动物接种和核酸检测等，其中巢式PCR灵敏度高，适用于流行病学调查[1]，目前基于529片段的巢式PCR被应用于弓形虫检测。

1 材料和方法

1.1 试剂 蛋白酶K购自Merck公司，Tris饱和酚和PCR扩增试剂购自康为公司，弓形虫RH株保存在本实验室，其余试剂均购自国内。

1.2 样品采集和处理 共计1909例组织和血样，随机采自省内的8个市场、12个家禽场和434位农户。采样后均置于-80℃超低温保存。

1.3 提取样品DNA 组织样入液氮研粉，血样去红细胞离心获取沉淀后于56°C蛋白酶K消化后次离心，留上清液提取样品DNA和弓形虫RH株。

1.4 巢式PCR扩增 样品基因组DNA为模板，引物序列如下，外套引物F： 5'-CGC TGC AGG GAG GAA GAC GAA AGTTG-3' 和R：5'-CGC TGC AGA CAC AGT GCA TCT GGA TT-3'；内套引物F： 5'-AGA AGG GAC AGA AGT CGA AG–3' 和 R： 5'–CTC CAC TCT TCA ATT CTC TCC–3'。引物由生工公司合成，PCR条件：95℃2min； 95℃30s，68℃30s，72℃50s，共35个循环；95℃30s，58℃30，72℃50s，72℃5min，共15个循环。弓形虫RH株DNA为阳性对照，正常血样DNA为阴性对照，ddH2O为空白对照。

1.5 统计分析 SPSS19.0软件，x2检验比较阳性率，P<0.05为差异有意义。

2 结果

2.1 扩增结果 目标条带是260 bp，即弓形虫529片段。RH株在260bp有明显条带，阴性对照和空白对照均无目标条带。

2.2 河南省家畜家禽中弓形虫阳性率