曲艺 刁非非 王斌 赵晓燕 熊华萱 陶涛 陆冠亚 王水明* （南京出入境检验检疫局 江苏 南京 210000 东营市正邦养殖有限公司 山东 东营）



基于新型小鹅瘟病毒VP3基因间接ELISA快速检测方法的建立

曲艺①刁非非②王斌①赵晓燕①熊华萱①陶涛①陆冠亚①王水明①*（①南京出入境检验检疫局 江苏 南京 210000 ②东营市正邦养殖有限公司 山东 东营）

应用PCR方法扩增了新型鹅细小病毒(NGPV)的VP3基因，然后将其克隆到原核表达载体中，获得重组质粒pGEX-VP3。将pGEX-VP3转化到DH5α感受态细胞中，诱导表达后分别用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行分析和鉴定。然后以表达的VP3蛋白作为抗原，包被ELISA板。分别对包被抗原的浓度、抗原封闭条件、血清的孵育条件、酶标二抗的孵育条件等进行优化，最终成功建立间接ELISA。VP3蛋白的包被稀释度为1:800，4℃包被过夜，5%脱脂乳4℃封闭过夜，血清稀释度为1:120，酶标二抗稀释度为1:1000，孵育时间为30min。此方法有良好的重复性及特异性，为临床检测新型细小病毒感染以及疫苗评价提供了参考方法。

新型小鹅瘟病毒 VP3蛋白 ELSIA 快速检测

2014年下半年来，在我国华东地区发生了一种以雏鸭发育迟缓，上下喙萎缩，舌头外伸、肿胀、下垂为特征的疾病，该疾病被命名为鸭短喙-侏儒综合征。该病的发病率为10%~20%，严重时可达50%，患鸭生长发育受阻，短喙舌头外伸导致饮水、采食困难，出栏体重明显低于健康鸭只，严重者仅为正常体重的50%[1]。部分患鸭还出现单侧行走困难、瘫痪等症状，并且发病鸭群日龄越小，大群的发病率越高，这给养鸭业造成了较严重的经济损失。……