任晓曦 赵 云 韩玉坤 郑 焱 杨 慧 张建亮

(首都医科大学基础医学院神经生物学系 北京脑重大疾病研究院 帕金森病研究所 教育部神经变性病重点实验室，北京 100069)

帕金森病(PD)是一种常见的神经退行性疾病，其主要的病理改变是黑质纹状体内多巴胺能神经元的选择性丢失及路易体形成〔1,2〕。α-突触核蛋白是路易体内的主要成分。证据表明，α-突触核蛋白可能是一种朊蛋白样的蛋白质，他可以聚集成有毒的多聚体形式并在细胞间成“种子”样传播〔3〕。目前认为α-突触核蛋白的寡聚体，可能就是“种子”的一种形式，α-突触核蛋白的寡聚体在被细胞摄取之后，可以使细胞内正常的α-突触核蛋白错误折叠并以它为核心发生聚集，在聚集的过程中不仅会对细胞产生毒性作用，还会有新的α-突触核蛋白寡聚体形成。新的α-突触核蛋白寡聚体被细胞排出后，继续影响周围细胞，开启一个恶性循环〔4〕。因此如果能及早检测出传播的α-突触核蛋白，不仅可以为PD的诊断提供重要的证据，而且还能在PD的早期对其进行干预治疗，缓解PD病理进程。本文中，我们利用高灵敏的荧光素酶human Gaussiaprinceps luciferase(hGLuc)作为报告蛋白〔5〕，构建了一套可以检测α-突触核蛋白聚集及传播的系统，该方法可以有效地检测α-突触核蛋白的聚集及在细胞间的传播，这为PD的早期诊断提供了思路，为PD的早期干预治疗提供了可能。

1 材料与方法

1.1材料 DMEM和胎牛血清(FBS，Gibco)，线性聚乙烯亚胺(MW，25 000，PEI)(polysciences,Inc.)，腔肠素(Yeasen),α-突触核蛋白抗体(BD),α-actin抗体(冠星宇)，Phusion高保真DNA聚合酶，Dpn1(NEB)，Amicon® Ultra-4 3KD离心过滤器(Millipore)。……