张永慧 邢椿伟 孙宽

烟台新时代健康产业日化有限公司 山东烟台 264006

伴随着科学技术的进步，替代技术的应用对其他产业发展也有着促进作用，例如：三维组织构建、产业化、细胞技术与模型，推动着检测技术的发展。怎样在化妆品检测中有效的应用替代方法成为企业或单位重要研究内容[1]。

1 替代方法检测发展

化妆品检测包含皮肤刺激检测、过敏检测、光毒性检测、光敏实验、皮肤渗透实验，也有很多功效检测，例如：美白、防晒、保温、补水、抗皱等。传统的化妆品检测以动物或人为试验品，检测时间长且消耗人力较大、经济投入高，一旦出现不良反应将给动物和人带来直接影响。现如今，伴随着科学技术的进步发展，出现可以替代动物或人的实验方法并得到了广泛应用。初期的替代方法为单层细胞培养，例如：MC、LC、KC、Fb等用于毒性检测中。3T3成纤维细胞中性红吸收光毒检测通过了EC/COLIPA检验。这种检测有着简单方便、经济投入小的优势，主要用于化妆品毒性检测，特别是在材料选择上发挥了不小的作用。不过，无法完全代替总体皮肤的检测。随后，提出了皮肤多种细胞立体培养，创建人工皮肤进行化妆品检测，例如：把KC与MC细胞培养形成人工表皮进行防晒剂与抗氧化剂效果分析，真皮成纤维细胞和血管内皮细胞共同培养形成人工真皮，这对化妆品刺激性检测效果显著[2]。现如今，体外建立含有表皮与真皮多层结构的器官型人工皮肤，得到了广泛应用，是替代方法主要研究内容。

2 替代方法在化妆品体外检测的应用

2.1 材料安全性检测

的替代方法是以取缔动物实验的核心，替代方法的模型创建、验证标准、判断方法以动物实验信息为准。所以，替代方法应用在检测人们健康风险的评价优于动物试验。标准的检测有助于对化妆品类型、表示、安全监督管理，体外方法改变了传统的半定量动物试验，趋向以数据信息为判断依据的生物学检测，提升了检测通量且结果客观。曾有学者利用CAMVA方法与BCOP方法检测数十种化妆品对眼部的刺激效果，实践证明：CVMVA方法特异性为97%、敏感度为100%、准确率为98%。BCOP方法敏感度为100%、特异性为83%、准确性为85%。替代方法适用于产品监督管理，不过其适用范围不同，比如：CAMVA和BCOP方法比较中，BCOP方法对在刺激性检测方面不准确[3]。

2.2 化妆品生产检测

替代方法具有精准性特点，适合应用于化妆品材料检测中，例如：相同材料的不同厂家，其工艺技术、杂质不同使得毒性影响不同，通过替代方法检验帮助选择适合的材料。如：短期暴露细胞试验选择刺激性温和的表面活性剂，BCOP方法选择适合商家。此外，替代方法可以提供不同的检测参数，有助于化妆品优化完善，比如：BCOP方法中得到的配方浊度参数、OD参数与体外评价，分数较高的配方可以降低一些元素含量实现优化，生产出温和的化妆品。关于刺激-剂量效应关系的材料，有助于确定材料安全性。

2.3 特殊化妆品检测

替代方法实现了信息量化与不同方法融合，深入分析检测参数有利于适应化妆品多元化需求，比如：BCOP方法体外评价低于3的化妆品为无刺激性，CAMVA方法对EC50低于3%的产品为无刺激性，建立三维表皮模型对无刺激性判断指标为组织活性超过50%。一般情况下，约高于临界参数的化妆品表示越温和，其使用范围较广，尤其是敏感人群的应用。实际检测过程中，采用标准方法也有助于方案优化[4]。比如：将温和的化妆品刺激性设置为BCOP体外评价低于1，CAMVA的EC50高于70%，皮肤模型组织活性高于80%。

2.4 组合应用

一种替代方法具有单一性，通过多种替代方法组合应用有助于对化妆品的全面分析。组合应用方法的使用要注意方法的适用性和限制性、成本投入、专业水平等。组合应用分为多种形式，建议根据OECD发布的IATA指南。比如：关于眼部刺激的由下自上方案以BCOP为主要形式，实践证明，CAMVA-BCOP联合应用检测化妆品眼部刺激性、敏感度为100%，特异性97%、精准度为98%。另一方面，复杂的毒性检测也可以采取组合应用，例如：将引起皮肤过敏的AOP各时期开发的替代方法整合，能够确保检测精准。将检测胚胎各时期的干细胞实验、全胚胎实验、斑马鱼试验融合检测化合物胚胎毒性。这种方法还适合应用在产品功能效果检测中，如：将酪氨酸酶抑制、B16或人黑色素细胞生成抑制、角质细胞捏取实验综合进行美白剂检测。抗老化功能的体外检测组合有酯酶抑制方法、成纤维细胞光老化检测等[5]。

3 结语

总而言之，替代方法指标的确立和创新是检验行业和化妆品企业需要正视的问题。人工皮肤替代产品的研发具有多学科性，如：检验科学、实验动物学、的皮肤医学等，有待进一步研究分析。在今后化妆品检测中，我国将进一步对替代方法展开研究，未来发展前景广阔。