冯昕晖, 谷建俐, 丁 婕

(1. 陕西省西安市雁塔区疾病预防控制中心 检验科, 陕西 西安, 710000;2. 陕西省西安市第三医院 药剂科, 陕西 西安, 710054;3. 陕西省西安市中心医院 药剂科, 陕西 西安, 710000)

医务人员直接与患者接触，其手表面微生物污染现象的发生极易对给患者病情及治疗效果造成不利影响，甚至引发严重的院内感染、多重耐药菌传播等严重后果[1-2]。以往医院多采用细菌培养法进行检测，其可对医务人员手部卫生情况进行准确评估，但同时也具有耗时长、操作复杂等不足[3]。随着研究的深入，临床上逐渐将三磷酸腺苷(ATP)生物荧光法应用于医务人员手表面微生物的检验中，并取得了一定的效果。本研究探讨ATP荧光微生物检验技术在医务人员手表面微生物检验中的应用效果，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年5月—2016年7月本院医务人员56名，其中男21名，女35名; 其中护士28名，医生15名，医技人员13名; 年龄21～51岁，平均(35.9±3.6)岁。

1.2 方法

所选取的56名医务人员均行ATP荧光微生物检验技术及微生物培养法检测。试剂与材料主要为瑞典BioThema公司提供的BiotechTMBT-112D 型生物荧光快速检测、BioThema 266-112型ATP生物应该检测试剂盒; 北京路桥技术有限责任公司提供的ATP提取剂、荧光素酶、裂解液、ATP标准品等。

以金黄色葡萄均菌进行菌悬液制备，取单个金黄色葡萄球菌菌落，在普通阴阳琼脂培养基斜面进行接种，并在37 ℃恒温培养箱内进行培养，培养时间为24 h, 再以生理盐水洗涤新鲜斜面培养物制成细菌悬液，以行微生物培养法检测。

ATP生物荧光法检测: 利用UltansnapTMATP采样器在医务人员手指屈侧进行往返涂擦方式采样，然后将采样棉拭子插回取样器，折断取样器上方的塑料阀门，并震荡反应液，待其充分反应后置入ATP生物荧光检测仪内，等待15 s, 然后对反应结果进行记录，数据记录为相对光单位值(RLU)。

微生物培养法检测: 以《医院消毒卫生标准》规定的方式进行操作，以采样棉拭沾取采样液，并从指根向指尖往返涂抹，然后于无菌条件下将棉拭子剪断，并置入10 mL采样液中，进行充分震荡后，将适量洗脱液置入无菌平皿中进行培育，于37 ℃的恒温环境中培养48 h, 然后对反应计数进行记录。

结果换算: 取不同浓度的金黄色葡萄球菌悬液各50 μL, 并将其分别置于无菌离心管内; 然后分别加入50 μL裂解液，混匀，然后在室温下静置10 min; 之后分别加入400 μL荧光素，迅速混匀，然后利用BiotechTM生物荧光快速检测仪进行第1次RLU值测定(M1); 然后再加入10 μL ATP标准品进行第2次RLU值测定(M2)。以5 M1/(M2-M1)×105为ATP含量。

1.3 观察指标

比较两种检测方法的检测结果，以医务人员手部细菌总数不超过10 cfu/cm2为合格; ATP生物荧光检测法规定以检测结果并超过1 RLU/cm2为合格[4]。

1.4 统计学分析

2 结 果

2.1 金黄色葡萄菌群含量与ATP含量的对应关系分析

金黄色葡萄球菌悬液含量在5.8×102～6.2×106时, ATP含量可随着菌数增加而升高，见表1。

表1 金黄色葡萄菌群含量与ATP含量的对应关系分析

2.2 两种检测方式对医务人员手卫生情况评估结果对比

经两种检测方式检查，医务人员手卫生合格率对比无显著差异(P>0.05), 见表2。

表2 两种检测方式对医务人员手卫生情况评估结果对比

2.3 ATP荧光生物检测法对医务人员洗手前后卫生情况测定结果分析

经ATP 荧光微生物检验法，医务人员洗手后ATP含量明显低于洗手前，且手表面微生物合格率明显高于洗手前，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 ATP荧光生物检测法对医务人员洗手前后卫生情况测定结果分析

与洗手前比较, *P<0.05。

3 讨 论

医务人员手部微生物污染极易引发严重的安全风险，导致交叉感染、院内感染等严重后果。因此，加强对医务人员手部微生物污染情况评估的重视就尤为重要[5]。微生物培养法是临床上检测医务人员手部微生物情况的常用方式，但其因自身所具备的多种不足之处而限制了其应用。随着研究的深入，临床上逐渐将ATP生物荧光法检测应用于物体表面、医疗器械表面及医务人员手部微生物情况的检测中。

ATP荧光微生物检测技术主要是以所有生物机体体内均可见程度不一的ATP，而经荧光素酶的催化作用，则可促使其与ATP发生反应，从而形成具有荧光的荧光素氧化产物; 同时其荧光强度会对着体内ATP含量的升高而加强，故而可作为反映人体微生物含量的有效指标[6]。有研究[7]显示，与传统的微生物培养法对比, ATP荧光微生物检测在医疗器械清洗效果方面可取得相同的检测结果，提示ATP荧光微生物检测具有实际应用价值。本研究结果显示，金黄色葡萄球菌悬液含量在一定范围内时, ATP含量可随着菌数增加而升高。经两种检测方式检查，医务人员手术卫生情况无显著差异(P>0.05), 提示ATP荧光微生物检测技术在医务人员手表面微生物评估中具有较高的可靠性。该检测技术还具有快速取样、测定与反应速度快、灵敏度高等特点，可显著缩短检测时间; 同时，其还可减少24 h培养而造成的滞后性，可更好地指导临床工作[8-9]。本研究结果显示, ATP荧光微生物检验法显示医务人员洗手后ATP含量明显低于洗手前，且手表面微生物合格率明显高于洗手前，差异均有统计学意义(P<0.05), 提示医务人员可通过严格洗手的方式来减少手表面微生物含量。