苏星予，廖 昂，邓启明，肖成琴，刘 芹

(重庆市永川区妇幼保健院检验科 402160)

宫颈癌是一种妇科恶性肿瘤，其发病率仅次于乳腺癌，位居全球第2位[1-2]。2012年全球约52.8万例宫颈癌患者，约26.6万例患者因宫颈癌而死亡[3-4]。同年，国内有61 691例新发宫颈癌病例，是全球范围的12%，有29 526例宫颈癌死亡病例，是全球范围的11%[5]。2015年中国癌症统计数据显示，我国宫颈癌的发病率在全球宫颈癌发病率中高居第2位[6]。目前，国人对人乳头瘤病毒(HPV)感染及其相关疾病与疫苗的认知情况因性别、民族和受教育程度等因素影响存在较大差异，大众普遍认知较低[3]。

近年的研究发现，HPV感染是宫颈癌发生、发展的必要非充分的因素，其感染通常表现为瞬时感染，且具有年龄差异[7-11]。目前，高危型HPV在宫颈癌病因学中的作用已得到广泛的研究[12-14]。研究发现，持续性感染高危型HPV是影响宫颈癌前病变及浸润性宫颈癌发生、发展的一个重要危险因素[8]。现已公认至少有12种高危型HPV，分别为HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58和HPV59型[3]。其中，HPV16、HPV18型与宫颈癌关系最为密切，是全球最主要的致癌性基因型[8,15]，但不同地区的主要致癌性HPV基因型存在地域差异，在中国、韩国和日本这些东亚国家，HPV58型在浸润性宫颈癌中更为常见[16]。

由于有效的大规模宫颈癌筛查，宫颈癌的发病率近年来明显降低[1,17]。HPV检测正在成为宫颈癌筛查的一个重要组成部分[12]。因此，检测并了解中国女性HPV的感染分布情况，将有助于我国宫颈癌防治工作的开展。本文通过对重庆市永川区7 500例农村女性HPV感染情况进行分析，为本区HPV感染的流行病学研究及疫苗研制奠定基础。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取重庆市永川区农村户口7 500例女性为研究对象，年龄35～65岁。其中，35～45岁2 605例，46～55岁3 299例，56～65岁1 596例。由本区妇幼保健院、金龙卫生院、朱沱卫生院、临江卫生院、陈食卫生院、板桥卫生院、仙龙卫生院、双石卫生院协助收集标本。每位受试者均了解本研究内容，经受试者同意后，由医师采集标本送检。

1.2仪器与试剂 HEMA 9600 PCR扩增仪购于珠海黑马仪器有限公司，YN-H18全自动核酸分子杂交仪购于深圳亚能生物技术有限公司，宫颈脱落细胞采集器购于深圳亚能生物技术有限公司，HPV基因分型检测试剂盒(15型)购于深圳亚能生物技术有限公司。

1.3方法

1.3.1标本采集方法 以窥阴器暴露宫颈，用棉拭子擦去宫颈口过多的分泌物，按宫颈脱落细胞采集器说明书，使用宫颈刷于宫颈口单方向旋转4～5周以获取足量的宫颈脱落细胞，并立即置于洗脱管中保存，做好标识后送检。

1.3.2DNA提取 充分洗脱宫颈刷，转移0.5 mL洗脱液于1.5 mL离心管中，13 000 r/min离心10 min，弃上清液，加入100 μL裂解液悬浮沉淀，金属浴加热10 min后13 000 r/min离心10 min，保留上清液备用。

1.3.3PCR扩增 取出PCR反应液，低速离心数秒，加入5 μL已提取的待测标本DNA，使总反应体系为25 μL，再次低速离心数秒后，按以下条件扩增：50 ℃ 15 min；95 ℃ 10 min；94 ℃ 30 s，42 ℃ 90 s，72 ℃ 30 s，循环40次；72 ℃ 5 min。

1.3.4杂交 参照标本数量，在全自动核酸分子杂交仪中放入相应数量的塑料三联杂交盒，并加入足量的纯水、A液、B液和C液。用干净手套取出膜条，按顺序编号后放入杂交盒中，由仪器自动加入A液，待仪器工作温度达到杂交温度后，加入已变性PCR产物标本杂交30 min。

1.3.5洗膜与显色 B液洗膜时，按孵育液配制表，在孵育盒中加入定量POD液体，仪器自动导入相应量A液。待B液洗膜10 min后，仪器自动加入POD孵育液孵育15 min。A液洗膜5 min，C液洗膜2 min后，按显色液配制表，于显色盒中配制足量的显色液，由仪器自动加入显色液。显色15 min，纯水清洗3 min后，即可进行结果判读。

1.3.6结果判读 根据膜条上蓝色斑点显现的位置，读取相应位置上标注的基因型信息，若仅一个基因型位点出现蓝色斑点，即为相应基因型的单一感染，若多个基因型位点出现蓝色斑点，即为相应基因型的混合感染。

1.4统计学处理 采用SPSS18.0进行统计分析，计数资料以n或百分率表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1各年龄段HPV感染率分析 在7 500例受检标本中，检出973例阳性标本，总感染率为12.97%。其中，35～45岁年龄组，2 605例受检，294例阳性，感染率为11.29%；46～55岁年龄组，3 299例受检，409例阳性，感染率为12.40%；56～65岁年龄组，1 596例受检，270例阳性，感染率为16.92%。3组中，56～65岁年龄组感染率最高，与35～45年龄组、46～55年龄组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 各年龄段HPV感染率分析

2.2HPV感染亚型分布情况 35～45岁年龄组，主要感染的型别以52型为主，其次为58型和16型，45型感染者最少；46～55岁年龄组，主要感染的型别以52型为主，其次为58型，11型感染者最少；56～65岁年龄组情况与46～55岁年龄组相似，主要感染的型别以52型为主，其次为58型，11型感染者最少。在所检的7 500例标本中，低危型感染以6型为主，其感染率约为0.44%(33/7 500)；高危型感染以52型感染为主，其感染率约为4.16%(312/7 500)，其次为58型，其感染率约为2.05%(154/7 500)，第3位为16型，其感染率约为1.52%(114/7 500)，第4位为51型，其感染率约为1.33%(100/7 500)，第5位为68型，其感染率约为1.28%(96/7 500)。多重感染型无重复计算。见表2。

表2 HPV感染亚型分布情况

续表2 HPV感染亚型分布情况

2.3HPV多重感染情况 在7 500例受检者中，HPV感染存在单一感染、二重感染、三重感染、四重感染、五重感染和七重感染6种情况，未发现六重感染情况。以单一感染为主，其感染率约为10.11%(758/7 500)；其次为二重感染，其感染率约为2.09%(157/7 500)。见表3。

表3 HPV多重感染情况

2.4HPV二重感染分布情况 在157个HPV二重感染者中，二重感染型别共有60种，以52型复合58型感染为主，感染率为0.13%(10/7 500)，其次为51型复合52型感染与52型复合68型感染，感染率为0.12%(9/7 500)，再次为16型复合52型感染、18型复合52型感染，以及18型复合58型感染，感染率为0.09%(7/7 500)。见表4。

表4 HPV二重感染分布特征

续表4 HPV二重感染分布特征

3 讨 论

宫颈癌是一种常见的女性恶性肿瘤，严重威胁着全球女性的健康[9]。相关资料显示，在宫颈癌标本中，几乎均能检测到HPV的存在，而持续性高危HPV感染已被认为是引发宫颈癌的主要致病因素[1,9,18]。通常，从HPV感染、宫颈上皮内瘤样变(CIN)、原位癌、早期浸润癌直至浸润癌，期间需要经历10年左右的时间[19]。因此，早期进行宫颈HPV筛查，可有效降低宫颈癌的发病风险，对防治宫颈癌具有重要意义[2,9,20-21]。

国内相关报道显示，我国HPV总体感染率约为25.0%，但各地区存在一定差异，其中，我国华东地区HPV感染率约为31.3%，东北地区HPV感染率约为34.6%，西北地区HPV感染率约为23.2%，西南地区HPV感染率约为24.1%[22]。为了解本区农村女性HPV的感染情况，本文对7 500例农村女性进行HPV检测，其HPV总感染率约为12.97%，明显低于文献报道的西南地区24.1%的感染率，考虑本文研究对象为筛查体检人群，而非医院门诊患者，这一结果提示不同研究人群可能由于其相应的HPV感染危险因素存在差异进而影响其HPV感染率。因此，我们将在今后的工作中深入研究本地区各人群HPV感染危险因素的情况，以期为进一步提升和改善本区HPV的防治工作提供基础。

本文中，本区35～65岁年龄段的HPV感染率随年龄呈现上升的趋势，与本地相关文献报道部分相符[23-24]。其中，35～45岁年龄组感染率为11.29%；46～55岁年龄组感染率为12.40%；56～65岁年龄组感染率为16.92%。3组中，56～65岁年龄组感染率最高，且与其他组相比差异有统计学意义。这表明在本区农村女性中，HPV感染存在一定的年龄差异，且中年女性的HPV感染率较高。

本文7 500例受检标本中，HPV感染以单一感染为主，其感染率约为10.11%(758/7 500)，说明本区HPV单一型感染较为常见，与本区其他报道相符[25-26]；其次为二重感染，其感染率约为2.09%(157/7 500)。在二重感染中，共有60种复合型别，以52型复合58型感染为主，感染率为0.13%(10/7 500)，其次为51型复合52型感染与52型复合68型感染，感染率为0.12%(9/7 500)，再次为16型复合52型感染、18型复合52型感染以及18型复合58型感染，感染率为0.09%(7/7 500)。随着感染型别的增加，其感染率也随之降低，七重感染仅检出1例，但此次并未发现六重感染者。有研究认为，高危型HPV多重感染可能更易导致宫颈瘤变的发生，因此我们除了重点关注高危HPV单一感染外，也需要对HPV多重感染引起一定的重视[27]。将单一感染和多重感染合计分析，发现本区HPV主要感染型别有HPV16、HPV52和HPV58，与本区部分报道中的前3位主要感染型别一致[26-28]，但HPV感染型别的排序不同，本文HPV感染型别按感染率高低排序依次为HPV52、HPV58和HPV16。该差异构成了本区农村女性HPV单一亚型感染的流行特征，进一步说明HPV感染亚型分布存在地域差异。

有报道显示，针对性的疫苗可有效防止相应型别的HPV感染，如对HPV16和18型的疫苗可以有效地防止HPV16型和18型感染，从而降低宫颈癌的发病率，表明不同地区针对当地HPV感染特征制订相应的防治措施十分必要[29-31]。而本区农村女性HPV感染独特的亚型分布特征，提示针对HPV16、HPV52和HPV58型的疫苗可能更适合本区农村女性。但为了更加全面地了解重庆地区女性HPV的感染现状，进一步改善宫颈癌的防治工作，还需要扩大研究人群及样本量，并对其相应的HPV感染危险因素进行深入、全面、系统的研究。