超数排卵处理对小鼠子宫组织结构的影响

2018-11-19顾红霞邹晨鹏

畜牧兽医科学 2018年13期

顾红霞，邹晨鹏

（赣州农业学校，赣州 341100）

0 引言

子宫是一个中空的肌质性器官，富有伸展性，是胎儿生长发育和娩出的器官。子宫借子宫阔韧带附着于腰下部和骨盆腔侧壁，大部分位于腹腔内，小部分位于骨盆内，在直肠和膀胱之间，前端与输卵管相接，后端与阴道相通。子宫阔韧带为宽而厚的腹膜褶，含有丰富的结缔组织、血管、神经及淋巴管，其外侧有子宫圆韧带。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验组织

超数排卵处理后的子宫10个和未经处理的子宫10个。

1.1.2 试剂与药品

70%、80%、90%、95%酒精及无水酒精、二甲苯、甲醛、苏木素液、1%的盐酸酒精、伊红水溶液、蒸馏水。

1.1.3 主要仪器

包埋机：型号KD-BM，浙江省金华市利迪仪器设备有限公司生产生产。

切片机：型号RM2235，上海莱卡仪器有限公司生产。推片机：型号TP-1，上海医疗仪器厂产品。

烘片机：型号KD-H，浙江省金华市利迪仪器设备有限公司生产。

显微镜及图像采集系统：型号OLYMPUS-BH2，沈阳市互利康医疗器械公司。

1.2 试验方法

1.2.1 子宫组织切片制作

（1）取材。取出超数排卵处理和未处理的小鼠子宫各10个，放在10%的福尔马林溶液中固定5～7 d，制作切片前于相同部位切取组织块。

（2）脱水。组织块用自来水冲洗4～6 h，然后再用不同浓度的酒精逐级脱水。脱水的时间如下：①70%酒精，4～6 h（也可长期保存）；②80%酒精，4～6 h；③90%酒精，4～6 h；④95%酒精Ⅰ、Ⅱ各4～6 h；⑤无水酒精Ⅰ、Ⅱ各 2 h。

（3）透明。酒精与石蜡不能混和，因此脱水后的材料在浸蜡前必须经过透明。透明剂既可替代组织中的酒精，又能溶解石蜡，有利于石蜡的渗入。二甲苯是常用的一种透明剂。将脱水后的材料经1∶1无水酒精与二甲苯→二甲苯（Ⅰ）→二甲苯（Ⅱ），各级时间为0.5～2 h，使组织达到透明为止。

（4）浸蜡和包埋。透明后的组织块做好标记，放入包埋机中，依次在石蜡Ⅰ（56 ～58 ℃）和石蜡Ⅱ（58～60 ℃）中浸蜡，各2 h，取出后再用60 ℃的蜡包埋，待蜡和组织块完全冷却，修整蜡块。

（5）切片、贴片和烘片。将修整好的蜡块置于切片机上进行切片，厚度为5 mm。选择较好的切片置于45 ℃恒温水浴锅中进行展片，2～3 min即可，用洗好的载玻片轻轻取出展好的切片，并将其放到烘片机上烘2～4 h。

（6）脱蜡、染色。将载有切片的载玻片依次放入下面的液体中进行脱蜡。①二甲苯Ⅰ、Ⅱ各5～10 min；②无水酒精1 min；③90%酒精1 min；④80%酒精1 min；⑤70%酒精1 min；⑥蒸馏水3～5 min；⑦苏木素液7～10 min；⑧1%盐酸酒精分色1～3 s；⑨自来水洗5～15 min；⑩伊红水溶液1～3 min；k70%酒精2 min；l80%酒精2 min；m90%酒精2 min；n95%酒精Ⅰ、Ⅱ各2 min；o无水酒精Ⅰ、Ⅱ各5 min；p蒸馏水3 min；q二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明各5 min。

（7）封片。中性树胶滴到组织上，盖上盖玻片，平置晾干，每组制片30张。

1.2.2 显微镜下观察

在显微镜下观察子宫的组织结构，拍摄照片并做好相关记录。

2 结果与分析

未经过超数排卵处理的小鼠，子宫黏膜表面较平整，子宫内膜上皮是单层柱状上皮，上皮细胞成矮柱状，少数腺体有弯曲，有腔的腺体很少，分布稀疏，子宫腺不发达，子宫壁相对比较薄，见图1、图2。超排后，在激素的作用下子宫开始发育，子宫壁厚度增加，子宫内膜胚性结缔组织迅速增生变厚，上皮为假复层柱状上皮，上皮细胞变得较高较密，腺体较弯曲，腺腔增大，腺体发达，有稀少分泌物，腺体分布较密，见图3、图4。子宫壁表面不完整，这是由于子宫内膜增厚，上皮细胞变密，子宫黏膜内的子宫腺非常发达，腺腔增大、弯曲、增生，分泌更加旺盛，血管迅速增长，间质疏松并有水肿，因此，切出的片表现不完整，有像突起和皱褶一样的结构。