马天华 辽宁省抚顺市新宾满族自治县卫生监督所 （辽宁 抚顺 113200）

内容提要： 目的：探究分析旋转恒温箱进行快速细菌和鉴定的实用性。方法：选取本县人民医院在2017年1月～2017年12月收治的怀疑沙门杆菌感染的败血症患者的血液标本，经BACTEC9120仪培养确定为阳性的50株细菌为当做临床标本，选取已知菌株和标准菌株组成模拟标本100份，随机分为两组，研究组采用旋转恒温箱进行培养，对照组采用普通恒温培养箱进行培养。结果：研究组阳性显示时间多在24h之内，显著低于对照组96h之内（P＜0.05），两组快速法判读结果相同，快速法结果判读所需时间少于常规法（P＜0.05）。结论：旋转恒温箱能够减少快速细菌培养和鉴定的时间，应用效果理想。

随着医学的发展，循证医学得到了广泛应用，对细菌进行快速检验并得出相应报告越来越重要。但是传统细菌增菌培养耗时长，一般在18h～38h之间，传统生化鉴定判断结果也要在16h～24h之间才能得出。采用旋转恒温箱进行快速细菌培养及鉴定能够有效减少所需时间，提高细菌快速培养和鉴定的效率，应用效果理想，现报道如下。

1.材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株。标准菌株：金黄色葡萄球菌（ATCC25923）、粪肠球菌（ATCC29212）、铜绿假单胞菌（ATCC27853）、大肠埃希菌（ATCC25922）、布鲁菌（ATCC25964）。已知菌株：100株分离鉴定并保存的临床标本以及全国和湖南省临床检验中心微生物室间质评下发的菌株[1]。

1.1.2 标本来源。临床标本：本院在2017年1月～2017年12月收治的怀疑沙门杆菌感染的败血症的血液标本，经BACTEC9120仪培养确定为阳性的50株细菌。模拟标本：已知菌株和标准菌株。

1.1.3 仪器THZ-92B恒温振荡器、恒温培养箱。

1.1.4 培养基与生化管。选用杭州微生物试剂有限公司生产的常规血液增菌培养瓶，实验室自制TTC琥珀酸盐血液增菌培养瓶（TTC瓶），按照传统配方将硝酸盐、尿素酶、七叶苷底物扩大10倍，每管0.4mL～0.5mL之间，5.0g/L的L-苯丙氨酸配成苯丙氨酸脱氨酶，1.0g/L的色氨酸配成靛基质[2]。

1.2 方法

1.2.1 制备模拟标本复苏传代已知菌株和准备菌株后，制成菌液，浓度为0.5McFarland，之后梯度稀释为含菌浓度为10CFU/mL的菌液，将常规瓶加入正常人静脉血，注入稀释后菌液，置入普通恒温箱培养；将分别置入旋转恒温箱和普通恒温箱的两瓶TTC瓶加入正常人静脉血5mL，之后注入稀释后菌液，分别在普通恒温培养箱和旋转恒温箱进行培养监测。生化实验所用浓度悬液由浓度为10.McFarland的菌液配成。

1.2.2 检出阳性瓶。普通恒温箱、旋转恒温箱分别放入已接种临床标本或模拟标本培养。常规瓶液体变浑浊，或TTC瓶液体变红后记录培养时间[3]。

1.2.3 接种生化管。接种针挑适量菌落用常规法接种，置于普通恒温培养箱培养；取一满环上述浓菌液采用快速法接种，置于普通恒温箱和恒温培养箱培养；恒温培养箱温度均为36°C。

1.2.4 判读生化管。2～6h普通培养快速法判读，1～4h旋转培养快速法判读，24h后常规法加入相应试剂，阳性七叶苷变黑色，苯丙氨酸脱氨酶变绿色，尿素酶（不加试剂）、靛基质、硝酸盐变红色，阴性则不变色[4]。

1.2.5 统计学处理。数据应用SPSS18.0进行分析，其中计数进行χ2检验，计量进行t检验，P＜0.05提示有显著差异。

2.结果

2.1 比较两组培养箱显示阳性所用时间

研究组阳性显示时间多在24h之内，对照组阳性显示时间多在96h之内，研究组培养箱显示阳性所需时间显著低于对照组，研究组效果显著优于对照组（P＜0.05），见表1。

2.2 比较快速法与常规法生化结果判断所用时间

研究组快速法七叶苷4h、尿素酶1h不加试剂判读结果，硝酸盐、苯丙氨酸脱氨酶、靛基质1h加入试剂判读结果。对照组快速法七叶苷6h，尿素酶2h不加试剂判读结果，靛基质、硝酸盐、苯丙氨酸脱氨酶2h加入试剂判读结果，常规法则要16～24h培养后加入试剂判读结果。研究组和对照组快速法判读结果相同，快速法结果判读所需时间少于常规法，研究组效果显著优于对照组（P＜0.05），见表2。

3.讨论

在临床上，由于传统微生物学检验结果判读耗时长，医生往往根据以往经验给药，容易产生耐药菌株，影响患者病情，浪费医疗资源。本文研究发现用旋转恒温箱进行快速细菌培养和鉴定，效果较好，同时发现，树脂、琥珀酸盐、氯化-235三苯基四氮唑（TTC）加入传统培养瓶中与旋转恒温箱效果相同，但是成本降低。旋转恒温培养箱能够使肉汤不断流动，为细菌提供足够营养物质和氧气，同时树脂会清除掉其代谢废物，为培养细菌提供适宜环境。本文数据显示，研究组阳性显示时间多在24h之内，对照组阳性显示时间多在96h之内，研究组培养箱显示阳性所需时间显著低于对照组。因为琥珀酸脱氢酶具有活化作用，伴随细菌繁殖，培养基变红色，显示细菌生长状况。传统培养是静止的，肉汤不流动，细菌生长状况难以判断且耗时长。本文研究中，最快可在6h内旋转恒温箱TTC瓶培养细菌就会显示阳性结果普通恒温箱则高于6h，旋转恒温箱培养时间短。旋转恒温箱中，1～4h高浓度底物和高浓度细菌悬液培养后就能得到结果，在普通恒温箱培养中，则要1～4h才能获得结果，并且快速法和常规法结果相同，但是快速法所需时间短。

综上所述，旋转恒温箱在快速细菌培养和鉴定中能减少所需时间，降低医疗资源消耗，效果理想。

表1. 比较两组培养箱显示阳性所用时间(例)

表2. 比较快速法与常规法生化结果判断所用时间(h,±s)

表2. 比较快速法与常规法生化结果判断所用时间(h,±s)

组别 靛基质 苯丙氨酸脱氨酶 七叶苷 尿素酶 硝酸盐还原研究组 1.0±0.2 1.0±0.3 4.0±0.4 1.1±0.1 0.9±0.4对照组(快速法) 2.0±0.1 2.0±0.2 6.0±0.2 2.0±0.1 2.0±0.2对照组(常规法) 16.8±0.5 16.2±0.3 24.2±0.6 18.6±0.7 17.5±0.4 t 10.023 9.998 13.256 12.025 11.987 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05