郭玉霞,郑绘霞

(1暨南大学第二附属医院，深圳市人民医院妇科,深圳 518020;2山西医科大学第一临床医学院病理科;*通讯作者,E-mail:huixiazheng62@126.com)

卵巢癌是死亡率较高的妇科恶性肿瘤之一,仅有25%的卵巢癌患者能早期发现,早期卵巢癌患者的生存率高达90%[1,2],因此,需要不断加强对卵巢癌免疫标记物的研究,从而提高卵巢癌的早期诊断率。生长抑制因子4(inhibitor of growth 4,ING4)属于生长抑制因子家族中的一员,有研究表明多种肿瘤组织ING4基因表达下调[3-5],本研究通过免疫组化方法研究ING4基因与卵巢癌发生发展的关系。

1 材料与方法

1.1 组织标本来源

选择2010-01～2018-06深圳市人民医院病理科及山西医科大学第一临床医院病理科存档的组织蜡块。其中深圳市人民医院交界性卵巢肿瘤15例,卵巢癌52例,山西医科大学第一临床医学院交界性卵巢肿瘤45例,山西医科大学第一临床医学院卵巢癌63例;浆液性囊腺癌65例,黏液性囊腺癌50例。临床分期依据FIG0 2000年分期标准,组织学分级、分化程度依据WHO分级标准。随机选择同医院同期的正常卵巢组织30例作为对照。取材前均未接受放疗、化疗或激素治疗。

1.2 试剂

兔抗人ING4多克隆抗体购自Santa Cruz公司。

1.3 免疫组织化学

所有石蜡标本进行切片,切片厚度4 μm。采用SP法检测ING4蛋白的表达情况,工作浓度是1 ∶100。以无菌PBS液代替一抗作为阴性对照,DAB显色。

结果判定:ING4蛋白的阳性表达以细胞核着色为棕黄色细颗粒状为标准,每张切片随机选取5个视野(×40),计数500个细胞,阳性细胞1%-25%为1分,25%-50%为2分,50%-75%为3分,76%-100%为4分。阳性强度:无色为0分,淡黄色为1分,黄色为2分,棕黄色为3分。二者之和0-2分为阴性,>2分为阳性[6,7]。

1.4 统计学分析

采用SPSS 19.0统计学软件进行处理,组间比较采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

ING4蛋白在胞核出现黄色或棕黄色的细小颗粒着色为阳性细胞。本研究通过免疫组化方法检测了ING4蛋白在不同卵巢组织中的表达情况,ING4在正常卵巢组织中高表达(93.3%),在卵巢交界性肿瘤组织(70.0%)及卵巢癌组织中表达下调(47.8%),差异有统计学意义(见图1、表1)。

ING4蛋白在正常卵巢组织、卵巢交界性肿瘤组织、卵巢癌组织中的表达呈下降趋势,ING4蛋白在不同组别间的表达差异有统计学意义(P<0.05,见表1)。ING4蛋白在卵巢组织中的表达与病理分期、组织学分级、组织学类型和淋巴结转移情况有关,差异有统计学意义(P<0.05,见表2)。

图1 ING4蛋白免疫组化法在卵巢组织中的表达 (SP,×100)Figure 1 Expression of ING4 in ovarian cancer (SP,×100)

表1 ING4在不同卵巢组织中的表达情况 (例)Table 1 The expression of ING4 in different ovarian tumor (cases)

3 讨论

ING4,又称p21ING4,是一种肿瘤抑制因子,定位于染色体12p13.31,编码249个氨基酸的蛋白质[8]，有ING1、ING2、ING3、ING4、ING5共5种同源体[9]。研究表明ING4与细胞的增殖、凋亡、侵袭、转移与血管生成等有关[10]。目前的研究表明ING4与肺癌[5]、胃癌[6]和结肠癌[7]等多种肿瘤的发生和发展有关。然而在国内有关ING4与卵巢癌的研究相对较少,因此,本研究通过免疫组化方法研究ING4在卵巢癌中的表达,以期为卵巢癌的诊断和治疗提供新的靶点。

表2 ING4在卵巢癌组织中与临床参数的比较Table 2 Comparison between expression of ING4 and clini-copathologic parameters in ovarian carcinoma

张萌等[11]通过免疫组化法检测膀胱尿路上皮癌中ING4蛋白的表达情况,与癌旁组织及膀胱正常黏膜组织相比表达降低,并且随着肿瘤分级及临床分期的增高,ING4表达水平逐渐下降,说明ING4蛋白与膀胱尿路上皮癌的发生与发展有关。曹芳等[12]通过PCR定量试验检测了ING4 mRNA在3种乳腺癌细胞株中的表达,结果说明ING4在3种乳腺癌细胞株中的表达均降低,说明ING4基因能抑制乳腺癌肿瘤细胞的生长,与乳腺癌的发生发展息息相关。我们通过免疫组化方法研究了ING4蛋白对正常卵巢组织、卵巢交界性肿瘤组织及卵巢癌组织中的表达情况,结果表明ING4在正常卵巢组织中细胞核呈强阳性表达,而在卵巢交界性肿瘤组织及卵巢癌组织中表达下调,差异有统计学意义。ING4蛋白表达与卵巢癌组织学分型有关,在浆液性囊腺癌中的表达下调比黏液性囊腺癌更显著;中高分化组较低分化组的表达下降;Ⅰ-Ⅱ期较Ⅲ-Ⅳ期的表达下降,差异有统计学意义,而无淋巴结转移者较有淋巴结转移者阳性表达率下降。这些结果与ING4在乳腺癌[12]和膀胱尿路上皮癌[11]中研究结果一致,ING4在卵巢癌中表达有不同程度的丢失,ING4的基因突变或表达异常甚至缺失可能参与了启动卵巢癌的恶变过程。

关于ING4在卵巢癌中作用仍有待进一步研究。ING4有可能为卵巢癌早期诊断、早期治疗提供新的诊断思路。