王 云， 谢维娜， 廖园燕， 丁晓东， 李 静

(安徽科技学院 动物科学学院，安徽 凤阳 233100)

长期便秘的犬通常表现精神不安，毛发粗糙、脾气暴躁，甚至发生自体中毒或继发其他疾病[1]。《华佗神方》中描述华佗通便神方为“止补其真阴，使精足以生血，血足以润肠，大便自出”，通过润肠理气、生津补气血的方式使机体排便正常。但是给犬灌服中药汤剂或者是给予中药丸剂，都存在一定困难。直肠给药属于中医特殊给药法，是药提取物或细粉与适宜基质混合后可制成供腔道给药的固体栓剂[2]，本试验将传统的华佗通便方汤剂改变剂型制成直肠给药栓剂，不仅克服犬口服给药的困难，亦具有直达病灶，作用时间长，刺激小，血液吸收效果显著、避免肝脏首过作用等栓剂优势。本研究旨在探讨华佗通便栓剂对犬血液细胞的影响，为宠物治疗开发新药新剂型和在中药治疗犬便秘方面提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验动物与饲养管理

健康成年中华田园犬12只，雌雄各半，笼养，进行免疫和驱虫。皮下注射犬五联疫苗进行免疫(吉林省五星动物保健药厂，批号：20180209)；伊维菌素注射液0.1 mL/kg肌肉注射进行驱虫(安徽天安生物科技股份有限公司，批号：20160416)。试验犬饲喂鼎新牌全犬期天然营养膳食配方犬粮(营养成分为粗蛋白≥28%，粗纤维≤4.5%，粗脂肪≥16%，钙≥1.1%，粗灰分≤9%，磷≥0.9%，亚油酸≥1.4%，水分≤10%)(保定宠康宠物饲料制造有限公司)，每天早晚各饲喂一次，自由饮水。

1.2 华佗通便栓剂的制备

华佗通便神方组成：熟地黄30 g、玄参30 g、当归30 g、川芎15 g、火麻仁3 g、大黄3 g、红花0.3 g、桃仁10 个，以上中药饮片均采购于安徽省皖亳大药房。按华佗通便神方配比五倍重量称取中药，取药材10 倍重量蒸馏水浸泡2 h，煎煮，沸腾后文火继续煎煮20 min，过滤，再加药材10 倍重量蒸馏水二次煎煮至沸腾后文火20 min，过滤。合并两次滤液，干燥浓缩比例为中药材∶浸膏=4∶1。栓剂配方:复方中药浸膏∶蒸馏水∶明胶∶甘油∶硬脂酸=1∶1∶2∶7∶1。工艺流程：采用热熔法。水浴温度80 ℃，液体石蜡润滑模具孔，倒入模具后冷凝15 min，切溢，取得。按照中国药典标准(2015版)质量标准，对华佗通便栓剂进行外观形状评价、融变时限评价和重量差异评价[3]。空白栓剂不加中药，只按上述比例用基质同法制成。制成的栓剂长约2.6 cm，重量在1.6～1.7 g之间。经外观形状、融变时限和重量检验进行质量检验，所有华佗通便栓剂和空白栓剂均符合栓剂质量要求。

1.3 试验药品与试剂

明胶(化学纯)；丙三醇(分析纯)；羧甲基纤维素钠(粘度3 000～5 000 mpas)；硬脂酸；以上试剂均购于上海麦克林生化科技有限公司。液体石蜡(化学纯,国药集团化学试剂有限公司)。

1.4 主要仪器设备

HH-3A单列单控三孔水浴锅(常州国宇仪器制造有限公司)，LE204E/02电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)，PE-6800VET全自动动物血液细胞分析仪(深圳市普康电子有限公司)，101AS-3型不锈钢数显电热鼓风干燥箱(上海浦东荣丰科学仪器有限公司)，子弹头型栓剂模具(SJM-10，长沙市湘劲机械设备)。

1.5 试验方法

1.5.1 犬的分组与给药 将12 只体重相近的中华田园犬按体重相近原则分为对照组和给药组，每组各6 只，雌雄各半，均正常饲喂鼎新犬粮，自由饮水。给药期7 d，每天上午10∶00，犬排粪后，对照组直肠组空白栓剂2颗，给药组直肠给华佗通便栓2颗。每天观察试验犬精神状态、粪便情况，在试验第0、8天称量犬体重、颈静脉采血，采血前均禁食12 h。

1.5.2 数据分析处理 试验数据采用SPSS 17.0软件分析，数据用均数±标准差(M±SD)表示，采用One-way ANOVA 数据分析方法进行比较。

2 结果与分析

2.1 栓剂质量测定结果

2.1.1 外观形状 外观形状评定结果为：栓剂外观为光洁、稍有弹性、富有光泽、完整无缺损的子弹型栓剂。华佗通便栓剂呈黑褐色，空白栓剂呈透明黄褐色。

2.1.2 融变时限 取华佗通便栓剂和空白栓剂各3粒，在室温下放置1 h后，置(37.0±0.5) ℃下进行融变时限测定。所有栓剂融变时限均在30 min内，符合规定融变时限要求。

2.1.3 重量差异 分别取10粒华佗通便栓剂和空白栓剂称重，重复三次。精密称重后，称得每颗重量在1.6～1.7 g之间，经过计算，重量差异均小于7.5%。

2.2 体重与状态

2.2.1 犬的体重 试验前后，对照组和给药组在第0天和第8天测12只犬的体重。根据表1数据分析，对照组中，第8天同第0天对比，体重无显著变化(P>0.05)；给药组中，第8天同第0天对比，体重无显著变化(P>0.05)；在第8天，对照组和给药组对比，体重无显著变化(P>0.05)。由此可得,华佗通便栓剂对犬体重的影响不显著(P>0.05)。

表1 各组体重的比较(M±SD, n=6)Table 1 Comparison of body weights in each group (M±SD, n=6)

注：第0天和第8天：*P<0.05，**P<0.01；给药组和对照组：#P<0.05，##P<0.01。下同。

Note: Day 0 and day 8:*P<0.05,**P<0.01; drug delivery group and control

group:#P<0.05,##P<0.01. The same below.

2.2.2 犬的状态 给药过程中，试验组的精神状态饱满；外界刺激犬眼、耳、尾、四肢，迅速反应；姿态自然，行为正常，动作协调。对照组精神状态良好；外界刺激犬眼、耳、尾、四肢，反应正常；姿态自然，行为正常，动作协调。给药组粪便状态：成型粪便，呈圆柱状，呈黄色。前5天排便量偏多，硬度偏硬，第3天排便量较多。第6天犬粪便量减少，粪便含水量较多，第7天犬粪便稀软不成形。对照组粪便状态：粪便干、较硬、排便量少，粪便成型，圆柱状，呈黄色、褐色。

2.3 血液细胞的变化

由表2可知，对照组中，同第0天对比，白细胞总数在第8天显著增加(P<0.05)，淋巴细胞在第8天显著减少(P<0.05)，中性粒细胞在第8天显著减少(P<0.05)，红细胞总数在第8天显著降低(P<0.05)，血红蛋白在第8天显著增加(P<0.05)，血小板总数在第8天极显著增加(P<0.01)；给药组中，同第0天对比，红细胞总数在第8天显著增加(P<0.05)，血红蛋白在第8天显著增加(P<0.05)，血小板总数在第8天极显著增加(P<0.01)。在第0天，给药组和对照组相比，无显著性变化(P>0.05)；在第8天，给药组和对照组相比，给药组红细胞总数显著增加(P<0.05)，给药组血红蛋白显著增加(P<0.05)。由此可见，华佗通便栓剂直肠给药后对犬血液中的红细胞总数、血红蛋白、血小板总数有增多的影响。

表2 各组血常规检测的部分结果比较(M±SD, n=6)Table 2 Comparison of partial results of blood routine tests in each group (M±SD, n=6)

3 结论与讨论

3.1 本试验血常规数据变化

犬血常规中，红细胞总数(RBC)正常范围在5.50×1012～8.50×1012/L，血红蛋白(HGB)正常范围在110～190 g/L，血红蛋白含量(MCH)正常范围在20.0～25.0 pg，血小板总数(PLT)正常范围在117×109～460×109/L。对照组和给药组第0天和第8天的红细胞总数、血红蛋白、血红蛋白含量、血小板总数均在正常范围。根据表2数据分析“华佗通便栓剂直肠给药后对犬血液中的红细胞总数、血红蛋白、血小板总数有增多的影响”，可以得出华佗通便栓剂直肠给药后对犬血液中的红细胞总数、血红蛋白、血小板总数的影响在正常范围内，呈现增多趋势，即表现为促进血液循环。白细胞总数(WBC)正常范围在6.0×109～17.0×109/L，淋巴细胞(LYM#)正常范围在0.8×109～5.1×109/L，中间细胞(MID#)正常范围在0.1×109～1.8×109/L，粒细胞(GRN#)正常范围在2.0×109～7.8×109/L。对照组第0天和第8天、给药组第0天和第8天的白细胞总数、淋巴细胞、中间细胞、中性粒细胞数值均超出正常范围，猜测试验犬体内存在炎症。由于12 只试验犬在试验期间精神状态、食欲等均表现正常，具体原因还需要进一步探索。

3.2 华佗通便神方成分分析

方中熟地黄：性平，微温，滋阴补血，益精填髓。玄参：凉血滋阴，兼有补性，泻火解毒。主泄肠、泻火。当归：性温，功补血活血，润肠通便，当归多糖具备造血功能[4]，以及抗凝血和止血的双重调解作用[5]；当归中的藁本内酯具有抗氧化、抗凋亡、抗血栓作用[6]。熟地黄与当归配伍，补血养阴，补而不滞[7]。川穹：性温，活血祛瘀；行气开郁；祛风止痛，川穹嗪在微血管扩张、血黏度降低、调节血小板功能等方面起作用[8]，降低血液黏度，改善血液流变作用，所含的阿魏酸有明显地抗血小板聚集的功能。火麻仁：性平，用于血虚津亏，肠燥便秘。主要成分脂肪油使肠道润滑，在碱性肠液的作用下生成脂肪酸，增强肠蠕动。大黄：性寒，泻下攻积，清热泻火，凉血解毒，逐瘀通经，利湿退黄。番泻甙是大黄泻下的主要成分，主要作用在大肠，通过增加肠蠕动和抑制肠内水分吸收，促进排便。桃仁和红花是常用药对。红花：性温，主要功能为活血能经；祛瘀止痛。红花黄色素具有抗血小板聚集作用，并对ADP已聚集的血小板有明显的解聚作用。桃仁：性平，主要功能为活血润燥，止痛散肿，通经。桃仁有抗凝血作用和抗血栓形成作用[9]，含有45%脂肪油，有润滑肠道作用。

3.3 试验存在的不足

犬便秘模型建立难度大，消耗时间长，申震等采用止泻剂复方苯乙哌啶120～150 mg/d给犬口服[10]，第90 d和120 d，平均粪便重量显著减少，肠道推进率显著减慢，说明便秘模型成功。由于条件所限，本试验设计未建立犬便秘模型，而是用健康犬做为试验动物。所以缺乏华佗通便栓剂对便秘犬的疗效研究。此外，试验用犬为中华田园犬，品种不纯，个体之间存在一定的差异，试验犬进入动物房之前仅进行了一般与系统检查，未进行实验室检查和特殊检查。对照组和给药组的白细胞、中间细胞、淋巴细胞、中性粒细胞值均高出正常范围，分析可能有个别犬患病而影响血细胞数据；对照组的第8天对比第0天，多种血细胞数据呈现显著差异，一方面与血液的新陈代谢有关，另一方面也与试验犬的数量较少，缺乏试验重复有关。此外，未增设梯度给药组进行对比研究。对华佗通便栓的主成分未进行测定，发挥主要作用的成分及含量不清楚，加工制作工艺仍需优化，未进行制剂稳定试验。

3.4 治疗便秘的中药栓剂研究现状和开发前景

栓剂克服了犬经口给药的危险性和困难性，直肠给药经肠粘膜吸收后大部分直接进入血液，减少经口途径消化酶对药物的破坏，也避免一些药物对胃黏膜的刺激，血液吸收效果佳显著且更有规律。栓剂给药方法简单易行。栓剂送入动物的肛门后，可软化肠道内蓄积的粪便，滋润肠道，减轻干硬粪便排出时对直肠粘膜及肛门的机械性损伤。目前查询到国内应用中药栓剤治疗便秘的研究报道较少，有运用黄芪、升麻、枳壳、石榴皮等份，研末成粉，加基质制成栓剂[11]。以紫草、鱼腥草、凤尾草、地锦草、荔枝核、五倍子为主成分制成的可治疗便秘的复方紫草栓[12]。专利CN105902720A介绍了治疗便秘的枳朴五仁通便栓主要采用枳实、厚朴、火麻仁、郁李仁、桃仁、杏仁、柏子仁、芦荟、壬二酸和木质素等[13]。专利CN1060967公开了用大黄、芒硝、蜂蜜、聚乙二醇制做肛门栓剂可治疗便秘[14]，消除腹胀，发挥清洁灌肠作用。治疗便秘的西药主要以泄药为主，毒副作用大，易胃肠产气、腹胀、肠肌无力，存在依赖性，停药后易复发。而中药栓剂为一种供腔道给药的外用固体制剂能够直击病灶部位具有良好的局部作用，为不便口服给药的动物带来较大的便捷。中药栓剂治疗便秘的相关研究具有较大的研究空间和广阔的研究前景。

综上所述，华佗通便栓通过增加粪便水分，促进血液循环而发挥治疗便秘作用。