厦门市中医院，福建 厦门 361009

防风属于临床常用的一种中药，最早记载见于《神农本草经》，属于伞形科植物防风的干燥根。东北地区和内蒙古东部是该药物的主产地，多数情况下在春秋两季进行采挖，将没有抽花茎植株的根上须去除，并对泥沙进行彻底的清除处理，在晒干处理之后切片，即得药材。防风性微温、味辛甘，具有解表祛风、胜湿止痛、止痉的治疗功效[1]。现代研究显示，挥发油、色原酮、香豆素、杂多糖等是中药防风的主要有效成分[2]，具有解热、镇痛、抗炎及抗肿瘤等活性。但不同地区因气候、土地、温度、湿度等外在环境的差异，导致防风在生长过程中受到影响，其主要成分出现失衡，并影响药效[3-4]。2015年新修订的《中国药典》规定对防风含量进行测定应该以升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷为指标成分[5]。研究就不同产地防风饮片中有效成分含量开展研究，侧重于分析内蒙古、黑龙江、辽宁、安徽等地区药物中的升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷等含量进行了检测，现报道如下。

1 仪器与材料

1.1 仪器 DHG-9240电热恒温鼓风干燥箱(上海徐吉电气有限公司)；LC-2010AHT 高效液相色谱仪( 日本岛津公司) ；XS105 电子分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；FA1004 电子分析天平(上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂) ；HH-S8数显恒温水浴锅(上海医疗器械五厂) 。

1.2 试剂与试药 升麻素苷对照品(批号: 111522-201508，中国药品生物制品检定所)；5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品(批号: 111523-201507，中国药品生物制品检定所)；防风饮片，采购自内蒙古、黑龙江、辽宁、安徽药材公司。甲醇为色谱纯，水为纯化水。

1.3 数据处理 采取SPSS18.0统计学软件进行数据处理，计量资料以(x±s)形式表示，统计分析采取t检查，计数资料统计分析采取x2检验，P<0.05时表示差异有统计学意义。

2 方法与结果

2.1 水分测定 将各地区采购的防风饮片经过充分的粉碎处理之后，将其过80目筛。取供试品2 g，通过平铺的方式，全部置于完全处于干燥状态的扁形称量瓶中，厚不能超过5 mm，精称后打开瓶盖，在100～105 ℃之间的条件下进行干燥处理5 h左右，而后再次盖上瓶盖，并再次转移至干燥器，进行30 min左右的冷却处理，进行精密称定之后仍然在上述温度条件下进行干燥处理1 h左右，进行充分冷却后称重，连续两次称重差异没有超过5 mg为合格。以减失重量为依据，对供试品中的含水量进行计算。防风饮片水分在10%以下。见表1。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Lichrospher C18(150 mm×4.6 mm，10 μm)；流动相：甲醇-水(35∶65)；检测波长：254 nm；柱温：40℃[3]；流速：1.0 mL/min；检测波长：254 nm。理论板数按升麻素苷峰计算应不低于2000。流动相稀释5～10倍后进样，对不同产地防风饮片中有效成分进行检测分析。

2.2.2 对照品溶液制备 精称升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品6.62 mg和6.35 mg置50 mL量瓶中进行溶解，并稀释至刻度线的位置之后进行充分的摇匀处理，为储备液。精取1 mL上述储备液置于量瓶，加流动相至刻度线的位置并充分摇匀，为对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 精称防风饮片粉末0.5 g后，置于规格为100 mL的圆底烧瓶中，加20 mL甲醇，称重后进行水浴回流处理2 h左右，充分放冷之后再次称重，采用甲醇补足减失重量，并进行摇匀、过滤，取1 mL续滤液，置于5 mL的量瓶中，加入流动相，稀释至刻度的位置，随后进行摇匀处理，过0.45 μm微孔滤膜，获得供试品溶液。

2.2.4 线性关系考察 精密量取对照品混合储备液0.25、0.5、1、2、4 mL，置于10 mL的量瓶，经流动相稀释后，摇匀，定容至刻度，按照2.2.1所示色谱条件下进样，对峰面积水平进行记录，绘制标准曲线，横坐标为对照品溶液浓度，纵坐标为峰面积，回归方程：5-O-甲基维斯阿米醇苷：Y=38498X+2114.6，r= 1；升麻素苷：Y= 35471X+693. 25，r= 0.9999。表明升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷分别在3.31～52.96 μg和18.00～50.80 μg范围内的时候具有良好的线性关系。

2.2.5 精密度试验 精称2.2.2项制备对照品20 uL，按照2.2.1所示色谱条件下，重复6次，测定升麻素苷及5-O-甲基维斯阿米醇苷峰面积值，结果RSD分别为0.87% 和 0.64%，均在2%以内，说明仪器的精密度良好。

2.2.6 重复性试验 取内蒙古产地的防风饮片样品，按照2.2.3项下所示方法制备6份供试品溶液，在2.2.1所示条件下进样检测，记录峰面积，结果RSD值分别为1.85%、1.67%，证实方法的重复性良好。

2.2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在配置后0、4、8、12、24 h后进样检测，升麻素苷峰面积RSD值1.87%，5-O-甲基维斯阿米醇苷为1.65%，证实供试品溶液室温下24 h内稳定性良好。

2.2.8 回收率试验 升麻素苷平均回收率为100.7%，5-O-甲基维斯阿米醇苷平均回收率为99.7%，对比差异无统计学意义(P>0.05)，提示两种药材加样回收率处于较高水平。见表2。

表2 加样回收率试验结果

2.2.9 样品含量测定 按照2.2.3项下所示方法对样品进行制备，在2.2.1项下所示色谱条件下进样检测，记录峰面积。结果示内蒙古产防风饮片中升麻素苷，5-O-甲基维斯阿米醇苷含量均高于其它产地，差异有统计学意义(P<0.05)。详见表3。

表3 不同地区防风饮片中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷含量测定

注：与内蒙古比较，#P<0.05。

3 讨论

防风为中医临床上常用中药，来源较为复杂，近缘种作为习用品的应用相对较多。防风性状鉴定相对困难，混淆品相对较多，栽培品种也不确切，从而造成药材质量参差不齐。防风产地在历代古籍中记载，包括有黑龙江、山东、山西、河南、浙江、江苏、湖北北部等地。目前，防风的主要产地在东北和内蒙古，质量以内蒙古产的更佳。

在中药材中，均会含有一定的水分，过多或者过少均会影响药材的质量，如果超过或者是没有达到本身应有的含水量水平，药材质量就会相应的出现一定的变化[6]。因此，在本次研究中，对防风饮片含水量观察发现，不同产地饮片含水量均符合箱套的要求[7]。将各地区防风饮片的含水量进行计算，其结果显示：第一批次平均含水量以安徽最高、其次为黑龙江、内蒙古、辽宁。第二批次排序则为内蒙古、辽宁、安徽、黑龙江；第三批次为黑龙江、安徽、内蒙古、辽宁。由此可见，防风饮片的含水量受地域性影响比较明显。

在药典规定采用甲醇溶解样品后，直接进样检测，实验中发现，峰形峰底相对较宽，并且存在严重的拖尾情况，经流动相稀释5～10倍后进样检测，峰形较高，并且尖，因此，实验中选择甲醇提取，流动相稀释的方法对样品进行了处理[8]。此外，在具体应用过程中，临床仍旧有必要释放更提高浸出物及含量测定的限度，以确保防风药材的有效性。

本次对不同产地防风饮片中有效成分含量对比分析研究，采取了对内蒙古、黑龙江、辽宁、安徽等地的防风饮片中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷含量进行检测，发现不同产地的防风饮片升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量存在差异，表现为内蒙古>黑龙江>辽宁>安徽，并且各地区防风饮片中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷含量均高于《中国药典》标准，这一结果与文献[9-10]报道结果一致。研究结果证实，不同产地防风饮片中有效成分含量差异显著，产于内蒙古防风饮片质量更优(P<0.05)，为今后药物采购与研究分析提供了一个较好的参考依据，应对其给予足够的重视。通过不同批次含水量和有效成分含量对比分析，可看出，防风饮片的含水量越高，升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷含量则较低。这对防风栽培起到一定指导作用，同时也为后续加样回收创造了有利条件，因升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷加样回收率处于较高水平。而通过进一步研究防风栽培品的用法及用量，得出防风栽培品的体重质实，含水分及糖分较之于野生防风较多，但含量则相对较少，因此在实际应用过程中，仍旧有必要结合临床和药理，制定更为合理的用法和用量，确保治疗效果。

综上所述，不同地区防风饮片中有效成分含量差存在差异，其中产于内蒙古防风饮片质量最佳，在药物采购与研究分析中，应对其给予足够的重视。