吴同垒，靳晓敏，王洪彬，陈 玥，张志强，高桂生，单晓枫，史秋梅*

(1.河北科技师范学院，河北秦皇岛 066004；2.吉林农业大学，吉林长春 130118)

美人鱼发光杆菌(Photobacteriumdamselae)是嗜盐病原菌中的重要成员，患病鱼临床以出血性败血症为典型特征，发病急，病程短，病死率高，造成了重大的经济损失[1-2]。美人鱼发光杆菌包括2个亚种，即美人鱼发光杆菌美人鱼亚种(Photobacteriumdamselaesubsp.damselae)和杀鱼亚种(Photobacteriumdamselaesubsp.piscicida)[3]。美人鱼发光杆菌毒力机制和基因研究不够深入，已知高致病力的美人鱼发光杆菌美人鱼亚种通常携带约150 kb的毒力质粒，编码2种关键性的毒力因子溶血素Dly和HlyApl，同时染色质中也携带溶血素Hlych基因，这3种溶血素都对细菌的毒力有不同程度的影响[4-5]。一般认为杀鱼亚种不具有溶血素，也不含有这种毒力质粒，但致病性与美人鱼亚种相比并不弱，且能引起机体多个部位的出血性病变[6-7]。

2015年11月，秦皇岛昌黎县某海水养殖场养殖的大菱鲆(turbot)大量发病，病鱼表现为体表溃疡，鳍部出血，尾部溃烂，严重腹水。本课题组从腹水中分离鉴定了美人鱼发光杆菌杀鱼亚种，并由中国海洋微生物保藏中心命名为MCCC 1K03226。本研究利用PCR方法检测发现其携带溶血素Hlych基因，原核表达和免疫原性分析结果显示，Hlych蛋白具有良好的免疫原性。分离的美人鱼发光杆菌杀鱼亚种获得了溶血素基因，其毒力可能会进一步增强，而Hlych蛋白可以用于建立ELISA诊断方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 美人鱼发光杆菌杀鱼亚种MCCC 1K03226，由河北科技师范学院预防兽医学重点实验室分离，中国海洋微生物保藏中心保藏；……