刘莉娟，邢燕，岳青芬

郑州大学附属洛阳中心医院妇科，河南 洛阳471000

宫颈癌的发病率居中国女性生殖道肿瘤的首位，严重威胁着女性的健康[1]。据统计，全球新发宫颈癌病例约为50万/年，其中约7/8的新发病例发生于发展中国家[2]。目前，宫颈癌患者就诊时多数已处于晚期，因此寻找一种与宫颈癌早期诊断、预后判断和靶向治疗有关的生物标志物十分迫切。细胞程序性死亡蛋白4（programmed cell death 4，PDCD4）是近年来新发现的一种凋亡相关基因，在细胞程序性死亡过程起重要作用。相关研究表明，PDCD4可以抑制肿瘤的发生、发展，促进肿瘤细胞凋亡[3]。据报道，PDCD4表达水平的变化与肿瘤病理分级和预后密切相关[4]。目前，关于PDCD4对宫颈癌细胞的影响及其在宫颈癌中的作用机制的研究比较缺乏。因此，本实验通过过表达PDCD4，检测其对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

宫颈癌HeLa细胞由郑州大学实验室保存；DMEM培养基购自美国HyClone公司；LipofectamineTM2000转染试剂盒购自美国Invitrogen公司；蛋白裂解液RIPA、蛋白酶抑制剂均购自北京康为世纪生物科技有限公司；二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白含量检测试剂盒购自南京凯基生物科技有限公司；PDCD4抗体、β-肌动蛋白（β-actin）抗体、β-连环蛋白（β-catenin）抗体、分泌型蛋白Dickkopf-1（DKK1）抗体、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）抗体、辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）标记的抗兔二抗均购自美国Cell Signal Technology公司。

1.2 细胞培养

将冻存在液氮中的HeLa细胞取出，迅速置于37℃水浴锅中复苏，随后转移至15 ml玻璃离心管中，加入含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素、0.1 mg/ml链霉素的DMEM培养基，轻轻颠倒混匀，离心，弃上清，细胞计数，在37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养，当细胞汇合度达70%～80%时，0.25%的胰蛋白酶消化，按1∶3传代培养。……