王娜 张国庚

(河北农业大学渤海校区，河北沧州 061100)

1 材料与方法

1.1 实验原理

水产品中的蛋白质提取可以利用氯化钠在恒温水浴锅不同时间和温度实现，用考马斯亮蓝G-250作为染料，与蛋白质结合后呈蓝色，波长595nm处测定光吸收值，光吸收值与蛋白质含量成正比。

1.2 实验材料和试剂

(1)扇贝(河北沧州黄骅市海鲜市场)；

(2)蛋白质标准溶液的配制[1]；

(3)考马斯亮蓝G-250试剂的配制[2]。

1.3 实验仪器

721型可见分光光度计(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)；漏斗；滤纸；烧杯；玻璃棒；量筒；手动匀浆器，容量瓶。

1.4 实验方法

a. 取三只小烧杯，各放入2g扇贝肉，调节恒温水浴锅温度85℃、90℃、95℃，用手动匀浆器搅碎贝肉，配制浓度分别为1%、5%、10%的氯化钠溶液100mL于3个锥形瓶中，恒温水浴锅里分别煮30min、45min、60min，过滤后提取液定容到100mL。

以此类推，做L9正交试验。

b. 蛋白质含量的测定

c. 标准曲线的制作

取6支试管并编号，按下表1加入试剂，摇匀后静置2min，595nm波长下比色测定。

表1 制作标准曲线所加试剂

d. 蛋白质含量测定

加入样品提取液0.1mL，考马斯亮蓝G-250试剂5mL，静置2min，曲线1号试管作参比，595nm波长下比色，记录光吸收值，比较样品蛋白质的含量[3]。

1.5 数据处理

a. 蛋白质标准曲线

以牛血清蛋白含量(μg)作为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制尺度曲线[4]。

图1 蛋白质的标准曲线

由图1可得蛋白质含量的曲线是y=0.0065x-0.0013，根据此方程便可得到正交试验9个样品蛋白质的含量。

b. 确定正交试验分析最佳条件

影响蛋白质沉淀的因素很多，如温度、溶剂浓度、温度，进行了正交实验。正交身分程度见表2，正交试验成果见表3和表4。……