华仙丽 ，李敬河 ，梁爱芬 ，雷亚丽 ，隋洪

(1、东莞康华医院，广东 东莞 523080；2、东莞市石碣医院，广东 东莞 523290)

地中海贫血是一组严重威胁人类健康的常染色体隐性遗传病，它是由珠蛋白基因突变导致珠蛋白合成数量不足或缺失引起的溶血性贫血[1]。我国长江以南地区是此病的高发区，尤以广东、广西、海南为甚。东莞市地处珠三角，人口结构复杂，聚居了南方各省务工人员，人口流动性大，不同人群之间通婚导致该地区地贫基因缺陷类型逐渐多元化，已成为当前影响出生人口素质的因素之一。因此，调查本地区地贫基因携带以及基因突变类型分布情况具有重要意义。当夫妇双方均为同型地贫携带者时，同型携带者婚配的下一代有1/4的机会患重症地中海贫血，出现严重贫血症状。因此，开展地贫筛查，必要时进行产前诊断，是防止重型地贫患儿出生，达到优生优育的重要措施。本文对东莞地区2016年1月-2017年10月期间β地贫基因携带者的基因频率和血常规结果及血红蛋白电泳结果进行了分析，以期明确本地区β地贫患者的基因分布，及其血常规参数及血红蛋白电泳的变化情况。

1 对象与方法

1.1 对象 东莞地区2016年1月-2017年10月期间，经基因诊断确诊β-地中海贫血携带的门诊及住院患者共340例，其中男110例，女230例。年龄7个月～71岁，平均年龄27.5岁。

1.2 方法

1.2.1 血常规检测 EDTA-K2抗凝血 2ml，迈瑞CD6800血细胞全自动计数仪检测。

1.2.2 血红蛋白电泳EDTA-K2抗凝血2ml，用SEBIA全自动毛细管电泳仪定量检测各血红蛋白成份的比例，分析异常血红蛋白区带。

1.2.3 β地贫初筛 同时进行血常规MCV/MCH和HbA2电泳分析的筛查，若 MCV＜82fl或（和）MCH＜27pg或（和）HbA2水平升高（＞3.5），则 β 地贫筛查阳性，即进行β地贫基因检测。

1.2.4 基因诊断EDTA-K2抗凝血2ml，用深圳益生堂地贫基因检测试剂，采用反向斑点杂交法检测β-基因的基因型别。

1.2.5 数据分析 经基因诊断为β地贫的患者，统计分析其血常规及血红蛋白电泳结果。数据均以均数±标准差（±s）形式表示。

2 结果

2.1 β-地中海贫血各基因突变类型及比例 340例患者中共检出11种β-地贫基因突变类型，其中CD41-42M/N最为常见，占36.76%，其次是IVS-2-654M/N，占26.47%，CD17M/N与-28M/N分别占13.82%，东莞地区的地贫基因突变类型以CD41-42M/N，654M/，N，17M/N，-28M/N 4 种突变为主，占β突变的90.85%。见表1。

2.2 α-复合 β-地中海贫血检测结果 见表2。

表1 β-地中海贫血各基因突变类型及比例(n，%)

2.3 β-地贫各基因型的血常规参数结果 -28/N的HGBMCVMCH与其他型别比较有统计学差异外，其余各组未见明显差异。见表3。

2.4 MCV、MCH、Hb电泳单项检测筛查地中海贫血的结果 在分子生物学技术确诊的基础上，评价MCV、MCH、Hb电泳对于β地贫筛查的灵敏度为99.02%、99.02%、99.35%。 见表 4。

3 讨论

β-地中海贫血是为常染色体单基因遗传血液病，是由于基因组中β珠蛋白基因突变导致β珠蛋白肽链缺如(β0)或合成不足(β+)所致，β-地贫单一杂合子可无临床症状或仅有轻度贫血；双重杂合子或纯合子患者临床表现为中度或重度贫血[2，3]。重度贫血的患儿，需定期或不定期输血，不接受治疗的患儿常常因发育迟缓而呈典型的 “地贫面容”，常在5岁以前因严重贫血或继发感染在儿童期死亡[2]。重型β地贫的患儿除非找到合适的供体进行造血干细胞移植才有治愈的希望。因此，了解本地区β-地贫发生率及突变类型，加强地贫的宣传教育，加强β-地贫产前筛查和产前基因诊断，仍是目前β-地贫防治最有效的措施。

表2 αβ复合型地中海贫血检测结果

表3 β-地贫各基因型的血常规参数及血红蛋白检测结果（±s）

表3 β-地贫各基因型的血常规参数及血红蛋白检测结果（±s）

CD41-42M/N IVS-2-654M/N CD17M/N-28M/N n 125 90 47 47 HGB(g/L) MCV（fL） MCH(pg) HBA（%） HBF（%） HBA2（%）106.62±18.03 110.60±20.22 102.22±17.57 117.88±24.50 64.83±5.64 65.63±7.12 63.71±4.89 73.39±5.29 20.35±2.36 21.02±2.49 20.11±1.44 23.40±2.11 93.39±1.41 93.35±1.55 92.96±1.60 92.67±2.08 1.47±1.37 1.93±1.44 1.83±1.69 2.35±2.34 5.36±0.51 5.13±0.36 5.43±0.88 5.53±0.47

表4 MCV、MCH、Hb电泳单项检测筛查地中海贫血的结果

不同地区、不同种族的人群有自已的常见基因突变类型。国内报道中国人最主要6种β地贫突变基因[4]分别为：CD41-42(-TCTT)、IVS-2-654(C＞T)、-28(A＞G)、CDl7(A＞T)、CD71-72(+A)、CD26(G＞A)。 在国内β地贫高发区CD41-42(-TCTT)基因突变在广东、广西、台湾、四川、海南四省占首位。IVS-2-654(C＞T)基因突变在香港占首位，而在广东、台湾、四川、海南等位居CD41-42突变之后。CDl7(A＞T)基因突变在广西排第二位，仅次于CD41-42(-TCTT)突变[5]。而地理位置靠近广西地区的中山小榄CDl7(A＞T)基因突变也排在第二位[6]。各研究[7-11]显示广东不同地区人口-28(A＞G)与CDl7(A＞T)突变人群比例排位略有不同。本实验数据显示，东莞地区排在前四位的是：CD41-42(-TCTT)占 36.76%占首位，IVS-2-654(C＞T)占 26.47%居第二位，-28(A＞G)和 CDl7(A＞T)各占13.82%（并列第三位），这四种突变类型约占全部突变类型的90.85%。本次统计东莞地区人口未区分户籍，东莞地区汇集广东各地及广西、海南等地的务工人员，-28(A＞G)和 CDl7(A＞T)突变的人群比例相近。

在β地贫基因型分组血常规参数比较中可以发现，-28M/N组的MCV、MCH、HGB最高，其原因是发生在转录启动子附近的突变-28M/N可影响到肽链合成的速率，而发生在编码区的突变41-42M/N和17M/N则影响到了肽链的稳定性及其产量。故-28M/N的贫血情况较其余三组轻。其余三组结果差异无统计学意义。

血红蛋白电泳对地贫的筛查起到了非常重要的作用，能够定量检测HbA、HbF、HbA2含量，将地中海贫血进行初步分为a地贫和β地贫，同时还可筛查出各种异常血红蛋白，如HbH、HbE、HbG等。有研究显示[12]，血红蛋白电泳可以筛查出95%以上的β-地贫或α-复合β-地贫，有助于临床β地贫确诊。当HbA2水平升高（＞3.5）时，产前诊断中若仅进行β-地贫基因诊断，忽视α-地贫基因诊断，会导致重症α地贫患儿的出生[13]。因此，在HbA2升高的可疑地贫人群中，有必要α和β基因一起检测，以免漏检α和β地贫基因携带情况。

迄今为止，中国人群已发现30余种β珠蛋白基因的点突变，本实验检测的17种基因型覆盖了我国β突变类型的95%以上[14]，本实验所用方法（PCR-RDB）不检测缺失型β-地中海贫血和罕见的β突变类型。因此，在对于地贫初筛阳性、HbA2升高提示存在β地贫，而常规PCR-RDB方法未检测到突变者要进行测序分析，避免罕见突变β地贫患者的漏诊，从而避免罕见突变引起重型β地贫患儿的出生[15]。

本研究在分子生物学技术确诊为β-地贫的基础上，评价MCV、MCH、Hb电泳对于β地贫筛查的敏感性为99.02%、99.02%、99.35%。三项联合检测对β地贫筛查而言，敏感性高，本研究未发现有漏检情况。说明这3个指标的联合检测对于β地贫是非常好的一个筛查策略。