阿依努尔·亚森

摘要：在对绵羊白细胞中的慢病毒Cdna gag基因进行检验时，通过PCG检测技术的应用还能够起到良好的检测效果，对于该病毒的防治以及促进我国养殖业的发展也有着一定的积极意义。

关键词：绵羊白细胞;慢病毒;PCR

中图分类号：S585.26

文献标识码：B

doi： 10.3969/j.issn.2096-3637.2018.10.003

0 引言

绵羊慢病毒会直接侵害中枢神经系统，导致脑膜脑炎等疾病的发生，并有着消瘦、呼吸困难以及淋巴滤泡性间质性肺炎等临床症状。其不同株尽管存在有一定的变异性，但是依旧存在有较高的同源性。通过PCR技术的应用能够对绵羊外周血白细胞基因组中的OPP前病毒cDNAgag基因片段进行扩增整合，借此来获得良好的OPPV检测方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物与血液样品

本次研究中主要选用了3株新疆拉库尔羊阳性血液以及2株新疆拉库尔羊阴性血液作为血液样品。

1.1.2 试剂

主要试剂包含有OPPV抗原以及标准OPPV阳性对照血清等。此外还需要应用到Shol限制性内切酶、Tap DNA聚合酶等。

1.2 方法

1.2.1 血清学实验

对200g凝血块离心10 min来进行血清的分离，在-20℃低温下进行存储，对5株新疆拉库尔羊的OPPV抗体进行血清检测。

1.2.2 DNA制备

在目标样品静脉抽取10 mL血，加入10 U/mL的肝素以及20 mL的淋巴细胞分离液之后，利用5000 r离心速度处理5 min。移除样品中的红细胞跟上清液，然后加入SDS使其浓度达到0.5%，在此基础上放入蛋白酶K进行10 h的孵育处理，期间震荡处理2～3次。处理完成之后加入等体积的酚进行混匀处理，然后在12000 r下离心处理10 min，通过70%乙醇洗涤1～2次，在室温条件下晾干。进行沉淀处理得到RNA酶，在4℃下进行悬浮沉淀处理5h，将制备完成后的DNA酶样品放置在-20℃低温下进行保存备用[l]。……