曹梦蕊，李荣旭，谭华龙，陈济铛，张溢珊，刘敏芳，陈建红，张济培

(佛山科学技术学院生命科学与工程学院，广东佛山 528231)

新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)属于副黏病毒科副黏病毒属，3′-NP-P-M-F-HN-L-5′构成其基因组，共编码6种蛋白[1]。其中F蛋白和HN蛋白为NDV的囊膜蛋白，在病毒感染宿主细胞和识别受体的过程中起到重要作用，同时与NDV的抗原性和免疫原性相关[2-3]。

新城疫(Newcastle disease，ND)是由新城疫病毒引起的禽呼吸道、消化道黏膜严重出血的一种传染病，是养禽业极为重视的传染病之一[4-5]。据报道，我国家禽感染NDV的病例报道越来越多，不仅表现在鸡群的感染情况，且水禽感染NDV的发病率、病死率逐渐升高，并以逐年增加的趋势向全国大部分地区蔓延[6-8]。本研究旨在对分离获得的12株NDV的F基因和HN基因进行分子遗传进化分析，从而了解广东部分地区NDV遗传进化情况。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 毒株 12株NDV由佛山科学技术学院禽病研究所分离、鉴定和保存，各毒株具体信息见表1。

1.1.2 引物设计 参考GenBank中的NDV全基因组序列，用Primer 5.0软件设计扩增F基因和HN基因的引物。本试验2对引物分别扩增出大小为2 653 bp和2 100 bp的2个片段，片段序列分别包含了F基因与HN基因开放阅读框。

1.2 方法

1.2.1 病毒RNA提取和RT-PCR扩增 12株病毒总RNA抽提严格按照TransZol Up Plus RNA Kit说明书进行，并按照反转录试剂盒(PrimeScriptTMⅡ 1st Strand cDNA Synthesis Kit)的使用说明书进行反转录，其产物进行各毒株F基因和HN基因的PCR扩增，PCR产物经10 g/L琼脂糖凝胶电泳检测分析。

1.2.2 序列测定及同源性分析 选取PCR扩增阳性产物回收纯化，与pMD18 T-Vector 16℃连接4 h，连接产物转化到感受态细胞中，于……