顾建青，何海娟，王良录，乔秉善，尹 佳

真菌是常见吸入性变应原之一，真菌过敏不仅可诱发I 型变态反应介导的变应性鼻炎和哮喘，而且可诱发Ⅲ型变态反应介导的变态性肺泡炎以及Ⅰ型和Ⅲ型变态反应共同介导的变应性支气管肺真菌病(allergic bronchopulmonary mycoses，ABPM)[1]。开展真菌过敏性疾病的临床及基础研究首先要明确所在地区气传真菌的种类、数量及飘散规律。本研究对北京城区进行了1年的真菌曝片监测，为北京地区的相关研究提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 采样地点

2010年1月1日至2010年12月31日采用每日不间断的真菌曝片法进行采样和测定，采样地点位于北京协和医院门诊楼4层楼顶，高度距地面15 m，周围30 m内无树木及任何污染源。地理位置为北纬39°54′39″，东经116°24′40″。

1.2 方法

1.2.1 采样方法：用重力沉降法进行曝片取样，取样器采用国内通行的叶氏花粉及真菌孢子取样器[2]，黏附剂采用白凡士林-液体石蜡[3]。定于每天早8∶00定时取片和换片。

1.2.2 镜检分类和计数：用琼脂-甘油染色剂染色，加盖22 mm× 22 mm 盖玻片封片。参照文献[4]的方法，于光学显微镜下对盖玻片下所有真菌孢子进行形态学鉴定并分类计数，记录真菌孢子的种类及数量，换算成1 000 mm2截面积上的真菌孢子数目，即气传真菌孢子含量。

1.3 统计学方法

采用Excel 2003版软件建立数据库。累加每种真菌孢子含量，制表、绘图并进行初步分析。

2 结果

2.1 2010年北京城区气传真菌孢子种类及含量

2010年共收集到真菌孢子25 118粒/1 000 mm2，各种真菌孢子汇总结果(按全年真菌孢子含量排序)见表1。北京城区气传真菌孢子中链格孢属孢子含量最高，占总量的 66.65%，为本地区绝对优势气传真菌孢子；枝孢属孢子次之，占 9.71%，含量超过 1%的还包括假格孢属、附球菌属、黑粉目、德氏霉属、锈菌目及细基格孢属孢子。

所收集到的真菌孢子共28种，其中绝大多数能鉴定到属，隶属于25属的分别为链格孢属、枝孢属、假格孢属、附球菌属、德氏霉属、细基格孢属、弯孢属、匍柄霉属、平脐蠕孢属、凸脐蠕孢属、内脐蠕孢属、假尾孢属、色二胞属、尾孢属、镰刀霉属、柱孢属、莢孢腔属、地舌霉属、毛壳菌属、疣蠕孢属、皮思孢属、脉孢霉、小链孢属及爱氏霉属；两种仅能鉴定到目，分别为黑粉目及锈菌目；能鉴定到种的仅粉红单端孢。

2.2 2010 年北京城区气传真菌孢子的月份分布

北京城区全年均可收集到气传真菌孢子，含量月分布结果显示6-7月为唯一高峰，主要气传真菌孢子为链格孢属、枝孢属、附球菌属及假格孢属等，占全年含量的 64.24%；8-10月次之，主要气传真菌孢子为链格孢属、黑粉目、假格孢属、附球菌属及枝孢属等，占全年含量的 25.10%(图1)。

占全年含量前五位的真菌孢子中，链格孢属在6-7月份为唯一高峰，占其全年含量的 69.47%，其中仅 6月份就占全年含量的 49.00%，8-9月份数量次之，占全年含量的 18.32%；枝孢属月份分布与之相近，6-7月份为唯一高峰；而假格孢属、附球菌属、黑粉目则均表现两个小高峰，第一高峰分别为6月、6月及9-10月，第二高峰分别为10月、9-10月及6月(图2)。

2.3 北京城区气传真菌日分布

链格孢属为北京城区绝对优势气传真菌孢子，高峰季节为6-7月，高峰时段为6月下旬，链格孢属孢子高峰季节含量日分布见图3。

3 讨论

真菌是常见的吸入性变应原之一。据估计，自然界中大约有150万种真菌，其中约8万种为人类所认知[5]，目前已知中国有真菌约4万种[6]。迄今为止已证实有112个属的真菌可诱发呼吸道变态反应性疾病[5]。真菌变态反应的人群患病率依地理及气候条件的不同而异，可高达30%[7]。

表1 2010年全年北京城区各种气传真菌孢子数量Table 1 Amount of different kinds of airborne fungi spores in urban area of Beijing in a whole year of 2010

图 1 2010年北京城区气传真菌孢子含量月份分布Fig 1 Mensal distribution of airborne fungi spores count in urban area of Beijing in 2010

图 2 2010年北京城区含量占全年含量前五位的真菌孢子月份分布Fig 2 Mensal distribution of top 5 airborne fungi spores count in urban area of Beijing in 2010

图 3 2010年链格孢属孢子高峰季节(6-7月)日含量分布Fig 3 Daily distribution of Alternaria spore count during peak season (June to July) in 2010

明确所在地区气传真菌的种类、数量及飘散规律是进行气传真菌过敏相关研究的前提，本研究对2010年北京城区的气传真菌曝片进行分析，全年共收集到真菌孢子28种达25 118 粒/1 000 mm2，绝大多数能鉴定到属，隶属于25属。本研究发现6-7月为真菌孢子数量的唯一高峰，占全年含量的 64.24%，其中仅 6月1个月份即占到全年含量的1/3；其次8-10月真菌孢子数量占全年含量约1/4。早在20世纪90年代初，本研究团队曾组织了迄今为止唯一的全国气传致敏真菌调查，在北京城区设置3个监测点，包括东城区的2个点和朝阳区的1个点，其中东城区第一监测点位于本次监测点。当年曝片法监测结果显示，全年共收集到真菌孢子 28 437粒/1 000 mm2，种类达32种，其中5-10月为高峰，占全年含量的 85.51%，当年6月份占全年含量的 24.89%[8]。与本次监测相近时段(2009 年10 月1 日至2010 年9 月30 日)，郝廷等[9]进行了北京市东郊气传真菌及花粉监测，曝片法结果显示全年共收集到真菌孢子 21 146粒/1 000 mm2，分属于38个属，高峰期分别为2009 年10-11月和2010 年6-9月。因该文献未提供气传真菌孢子月含量总数，故未能计算两高峰占全年含量的百分比。分别于同一监测点不同时期、相近时段北京城郊区不同监测点的监测结果显示，收集到的真菌孢子总数差异较大，真菌高峰时段亦不相同。既往较多的报道发现，气传真菌孢子的数量与气象因素及地理因素有关，国外的研究结果显示，大气中链格孢属孢子数量与降雨量以及当日平均、最高、最低气温、露点温度及气压显著相关[10-11]。杨辰宸等[12]的研究结果显示，温度是与空气中真菌数量相关性最密切的气象因素，天气状况(阴、晴、雨等)也与气传真菌孢子数量具有相关性，而其他气象因素如湿度、风向、风力与空气中真菌数量无显著相关。同一监测点不同时期的真菌孢子总数及高峰时段的差异可以用不同年份气象学参数的差异进行解释，但相近时段北京城郊区不同监测点结果之间的差异无法用气象因素及地理因素解释，推测与局部小环境如植被、腐殖质暴露等有关。

本次曝片法监测的结果显示，北京城区大气中链格孢属孢子为本地区绝对优势气传真菌孢子，占全年总量的 66.65%；含量超过 5%的真菌属还包括枝孢属、假格孢属、附球菌属及黑粉目孢子。20世纪90年代初同一监测点测得的全国气传致敏真菌调查曝片法结果证实链格孢属孢子亦为绝对优势气传真菌孢子，占全年总量的 42.30%，含量超过5%的真菌属还包括黑粉菌、大枝孢菌及锈菌[8]。相近时段北京东郊监测点曝片法结果显示，链格孢属孢子亦为绝对优势气传真菌孢子，占全年总量的59.60%，含量超过5%的真菌属仅包括黑粉菌属，含量超过 4%的还包括枝孢属、附球属及锈菌属[9]。上述分别于同一监测点不同时期、相近时段北京城郊区不同监测点的监测结果表明，链格孢属孢子确为本地区绝对优势气传真菌孢子，其他的共同优势气传真菌孢子还包括枝孢属、黑粉目及锈菌属，而假格孢属、附球菌属为近年北京城郊区新检测到的优势气传真菌孢子。造成上述监测结果差异的原因目前尚不明确，可能与气象因素、局部环境的不同或改变、不同真菌的最适生长条件的差异有关。

本次研究结果显示链格孢属孢子为北京城区绝对优势气传真菌孢子。在全世界范围内链格孢属、枝孢属、青霉属及曲菌属是常见的致敏真菌[5]，其中链格孢属研究的最充分[13]。链格孢菌在人群的致敏率目前尚不清楚，Mari等[14]对4 962例呼吸道变态反应性疾病患者的调查结果显示，19%的患者对一种或以上的真菌变应原皮肤试验阳性，真菌变应原皮肤试验阳性患者中，有66%的患者对链格孢菌皮试阳性。岳凤敏等[15]对28种常见气传真菌致敏性分析的结果显示，200例真菌过敏患者中88例链格孢皮试阳性。目前国外的研究结果已证实链格孢免疫治疗安全有效[16]。对国产链格孢变应原皮试液用于诊断链格孢变态反应性疾病的研究结果显示，应用链格孢变应原原液的1∶100 稀释液进行皮内试验可以安全、有效地诊断链格孢引起的变态反应性疾病，以变态反应专科医生临床综合诊断作为金标准，以皮内试验结果≥ +作为诊断界值，灵敏度为0.886，特异度为0.894，准确度为0.894[17]。目前尚缺乏对国产链格孢变应原制剂用于免疫治疗疗效及安全性评估的高水平循证医学研究，亟待填补空白，以为今后的临床实践提供循证医学证据。

青霉属及曲菌属等体积较小的孢子采用重力沉降法检测易被遗漏，应同时辅之以曝皿法。遗憾的是，由于不可抗拒的人的因素(不是人为因素)，曝皿法结果丢失，有待在今后的工作中加以弥补。郝廷等[9]在相近时段北京东郊真菌曝皿法的结果显示培养的主要真菌是链格孢属、青霉属、枝孢属及无孢群等，可供参考。

综上所述，北京城区全年均可收集到气传真菌孢子，6-7月为唯一高峰，主要气传真菌孢子为链格孢属、枝孢属、附球菌属及假格孢属，其中链格孢属为优势气传真菌孢子。