李春燕 傅红梅 李嫣红 谭毅刚 刘 欣

世界卫生组织在1992年将同时耐异烟肼和利福平的结核病定义为耐多药结核病，耐多药结核病存在治疗周期长、高治疗成本和低治愈率等问题[1]。快速地对分枝杆菌异烟肼及利福平耐药性测定，对治疗方案的制定和结核病流行非常重要的意义。随着分子生物学的发展，开发出了多种快速、客观、准确的耐药基因检测新诊断方法，如线性探针技术、基因芯片技术及探针熔解曲线技术等[2]。

近年来已有一些实验室的研究分析熔解曲线技术对结核分枝杆菌耐药性的测定。本文从临床应用角度观察，对PCR熔解曲线法结果总结，以培养法药敏试验作为金标准，分析熔解曲线法检测利福平、异烟肼耐药性的敏感度和特异度,探讨其在耐药结核病的诊断意义和应用价值。

1 对象与方法

1.1 对象

纳入广州市胸科医院2016年6月-2016年11月住院期间痰涂片找到分枝杆菌的200例患者，其中男149例，女51例，年龄16～85岁，其中初治患者147例，复治患者53例。

1.2 方法

1.2.1 标本的收集 对以上200例患者痰涂片抗酸染色阳性的痰标本进行分离培养，使用BACTECTMMGIT960TM全自动分枝杆菌培养仪。痰标本分离培养按照中国防痨协会《结核病诊断实验室检验规程》[3]进行。

1.2.2 药敏试验 对分离培养出的菌株进行结核分枝杆菌的菌种鉴定并进行异烟肼、利福平等药敏实验，操作均按照中国防痨协会《结核病诊断实验室检验规程》进行。

1.2.3 PCR熔解曲线法检测利福平和异烟肼耐药性 按照PCR熔解曲线法结核分枝杆菌利福平耐药突变检测试剂盒(厦门致善生物科技股份有限公司)和异烟肼耐药突变检测试剂盒(厦门致善生物科技股份有限公司)说明书操作。……