郁桦 石根勇 朱勤

【摘要】目的：对氨基葡萄糖硫酸盐、硫酸软骨素、维生素D3及碳酸钙等为主要成分的氨基葡萄糖硫酸盐复合制剂增加骨密度的功效进行验证，方法：每天经口给予大鼠含有0. 3g/kg. bw、0.6g/kg. bw、1.8g/kg. bw氨基葡萄糖硫酸盐复合制剂（相当于人体推荐剂量的5倍、10倍、30倍）的饲料90天，同时设一个低钙对照组（150mg/lOOg饲料）和一个碳酸钙对照组（与高剂量钙水平相同的碳酸钙对照组）。测定大鼠的股骨骨密度、钙含量及钙的表观吸收率；观察大鼠的生长发育情况。结果：高剂量组动物实验末的身长显著高于低钙对照组（p<0.05）；高剂量组动物股骨中心及远心端骨密度、股骨钙含量、总钙量显著高于低钙对照组（p<0.05）；中计量组和高剂量组大鼠摄入钙、粪钙和尿钙含量显著高于低钙对照组，钙的表观吸收率和存留率显著低于低钙对照组，差异具有显著性（p<0.05）。高剂量组实验大鼠的以上各项指标与相应的碳酸钙对照组比较差异没有显著性（p>0.05）。结论：根据《保健食品检验与评价技术规范》增加骨密度功能检验方法的判定标准；氨基葡萄糖硫酸盐复合制剂具有增加骨密度功能。

【关键词】保健食品 骨密度氨基葡萄糖硫酸软骨素

【中图分类号】R9

【文献标识码】A

【文章编号】2096-5249（ 2018） 03-023-02

骨质疏松症是一种由多种原因引起骨量减少和骨组织观念显微结构退行性改变为特征，骨脆性增加、易发骨折的一种全身代谢性骨病。增加骨密度功能食品是市場需求较大的保健食品，其中以钙剂辅以氨基葡萄糖、硫酸软骨素、维生素D3配方较多见，维生素D3具有促进钙吸收的作用。氨基葡萄糖是一种氨基单糖，是形成所有结缔组织包括软骨基质葡糖胺聚糖的基本成分[1-2]。硫酸软骨素是存在于人和动物结缔组织中的酸性黏多糖，主要分布于软骨、骨、肌键、肌膜和血管壁中，因具有多种生物活性而得到广泛应用。硫酸软骨素能够预防和改善骨关节病，对受损的软骨组织进行修复[3]，本实验为了验证其增加骨密度的作用，旨在为补钙类产品配方评价提供思路，现将结果报道如下。

1 材料和方法：

1.1 受试物：

氨基葡萄糖硫酸盐复合制剂，推荐量为60mg/kg.bw，本产品钙摄人量约460mg/d，氨基葡萄糖硫酸盐摄入量约800mg/d，硫酸软骨素摄入量约630mg/d，维生素D3摄人量约6.75μg/d，受试物是以补钙为主，按照《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）增加骨密度功能检验方法方案一的检验方法设计实验。

1.2 剂量设计：本实验设低、中、高三个剂量组，剂量分别为0.3g/kg.bw、0.6g/kg.bw、1.8g/kg.bw，相当于人体推荐量的5、10、30倍，另设一个低钙对照（ 150mg/lOOg饲料）和一个碳酸钙对照组，该组与高剂量组钙含量相同。

1.3 受试物配制：将受试物掺入低钙饲料中喂养，低钙基础饲料配方按《保健食品检验与评价技术规范》推荐方法，饲料摄入量按体重的8%折算。按0.38%、0.75%和2.25%比例，分别将受试物掺人低钙饲料中制成低、中、高剂量组受试物。另在低钙饲料的基础上掺人0.74%碳酸钙，制成碳酸钙对照组饲料。

1.4 给予受试物：将掺入不同剂量受试样品的低钙饲料分别给予各剂量组大鼠自由摄食，饮用去离子水。

1.5 实验动物及动物实验室：SPF级雌性SD健康大鼠，体重70.4±2.7g，由长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供，动物生产许可证号：SCXK（湘）2009-0012，饲料由北京绿恒泉营养保健食品技术开发有限公司提供；动物房为屏障环境，动物使用许可证号：SYXK（湘）2010-0010，环境温度22-24℃，湿度50-56%。

1.6 主要仪器与设备：骨矿物测定仪（SD-1000℃）。

2.方法

2.1 试验方法：大鼠检疫3天后，将50只大鼠按体重随机分成5组，分别为受试物低、中、高三个剂量组，低钙对照组和碳酸钙对照组，每组10只，单笼饲养，连续喂养90天。

2.2 观察指标

2.2.1 体重：每周称重一次。

2.2.2 股骨重量测定

大鼠喂养90天后处死，剥离出右侧股骨，于105℃烤箱中烤至恒重，称量骨干重。

2.2.3 股骨骨密度测定

用骨矿物测定仪测量左侧股骨骨中点及远心端的骨密度。

2.2.4 骨钙含量及饲料含钙量测定

用原子吸收法测定。

2.2.5 钙吸收实验

2.2.5.1 生长发育

大鼠从单笼给予受试物始至4周，每周测量身长、称重1次。

2.2.5.2 代谢实验

实验3周后进行3天钙代谢实验，记录3天进食量，收集72小时粪便，用原子吸收法测定饲料及粪便中钙含量。

摄入钙（mg/天）=饲料中钙含量（mg/g）×饲料消耗量（g厌）

粪钙（mg/天）=粪便中钙含量（mg/g）×粪便非出量（g/天）

钙的表观消化率（%）=（摄入钙一粪钙）/摄入钙×100%

2.3 统计处理

数据用SPSS软件包进行方差分析，按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐计算F值，F值（F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行研究适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行研究统计。

3 结果

3.1 氨基葡萄糖硫酸盐复合制剂对大鼠体重的影响（见表1）。实验前各组大鼠的起始体重差异没有显著性（P>0.05）；实验末各剂量组大鼠的体重和体重增加值与低钙对照组相比差异没有显著性（P>0.05）；高劑量实验组大鼠的终体重及其净增加值与碳酸钙对照组相比差异没有显著性（P>0.05）。

3.2 氨基葡萄糖硫酸盐复合制剂对大鼠身长的影响（见表2）。实验前各组大鼠的起始身长差异没有显著性（P>0.05）；高剂量组大鼠实验末的身长显著高于低钙对照组（P<0.05）；高剂量组实验末大鼠的终身长及其净增加值与碳酸钙对照组相比差异没有显著性（P>0.05）。

3.3 氨基葡萄糖硫酸盐复合制剂对大鼠股骨长度和骨密度的影响（见表3）。实验前各组大鼠的起始股骨长度差异没有显著性（P>0.05）；高剂量组大鼠实验末的股骨远心端骨密度、股骨中心骨密度显著高于低钙对照组（P<0.05）；高剂量组实验末大鼠的股骨远心端骨密度、股骨中心骨密度与碳酸钙对照组相比差异没有显著性（P>0.05）。

3.4 氨基葡萄糖硫酸盐复合制剂对大鼠股骨长度和骨密度的影响（见表4）。实验前各组大鼠的起始股骨长度差异没有显著性（P>0.05）；碳酸钙对照组大鼠实验末的股骨总钙量显著高于低钙对照组（P<0.05）。高剂量组大鼠实验末的股骨钙含量、总钙量显著高于低钙对照组（P<0.05）；商剂量组实验末大鼠的股骨重量、股骨钙含量及总钙量与相应的碳酸钙对照组相比没有显著性差异与碳酸钙对照组相比差异没有显著性（P>0.05）。

3.5 氨基葡萄糖硫酸盐复合制剂对大鼠摄入钙、粪钙、尿钙的影响（见表5）。中高剂量组、碳酸钙对照组大鼠摄入钙、粪钙及尿钙含量显著高于低钙对照组（P<0.05）；高剂量实验组大鼠的摄入钙、粪钙和尿钙含量与相应的碳酸钙对照组相比差异没有显著性（P>0.05）。

3.6 氨基葡萄糖硫酸盐复合制剂对钙表观吸收率和钙存留率的影响（见表6）。中、高剂量组、碳酸钙对照组大鼠钙的表观吸收率及钙的存留率与相应碳酸钙对照组相比没有显著性差异（P>0.05）。

4.讨论

氨基葡萄糖硫酸盐复合制剂按其推荐剂量，钙摄入量约460mg/d，氨基葡萄糖硫酸盐摄人量约800mg/d，硫酸软骨素摄入量约630mg/d，维生素D3摄入量约6.75μg/d，对于改善骨质疏、增加骨密度，效果显著。高剂量组大鼠股骨中点及远心端骨密度高于低钙对照组（P<0.05），且与碳酸钙对照组相比，差异无统计学意义（P>0.05根据《保健食品检验与评价技术规范》评价标准，可以认定该产品具有增加骨密度作用。

参考文献：

【1】刘茵，颜耀东，张娟等.氨基葡萄糖，硫酸软骨素与胶原蛋白治疗骨关节炎的研究工作进展[J].慢性病学杂志：2013 ，14（12）：919-921.

【2】王亚，陈彦，戛树开等硫酸软骨素制备工艺的纯化[J].中国生化药物杂志，2006，27（1）： 12-14.

【3】魏庆宏硫酸软骨抑制实验性骨关节炎软骨细胞凋亡的体内研究[J].中国生化药物杂志，2016，5（36）：47-50.