江苏省徐州市部分猪场母猪弓形虫感染抗体检测

2018-09-07王玉燕昌莉丽张林吉汪鹏旭王善辉

中国动物检疫 2018年9期

王玉燕，昌莉丽，张林吉，王飞，汪鹏旭，王善辉

（1. 徐州生物工程职业技术学院，江苏徐州 221006；2. 拜耳（四川）动物保健有限公司，四川成都 610000）

弓形虫病是一种人兽共患寄生虫病，呈世界性分布，属于我国二类动物疫病。该病病原是弓形虫科、弓形虫属的刚第弓形虫（Toxoplasma gondii），寄生于动物和人有核细胞内。猫是弓形虫唯一终末宿主，其中间宿主范围广泛，包括人、畜、禽及野生动物等，养殖动物中以猪最多见。临床上各阶段猪只均可感染弓形虫，患猪主要表现高热、呼吸困难和神经症状，以及公猪睾丸肿大，妊娠母猪流产或产死胎等症状[1]，多为轻症和隐性感染，但在免疫力低下时，隐性感染可表现病症。

为了解徐州市母猪群的弓形虫感染及流行状况，2017年5—6月，采集徐州市5个猪场的321份母猪血清进行弓形虫抗体检测，为该地区猪场弓形虫病防控提供数据参考。

1 材料与方法

1.1 样品采集

选择徐州市5个未免疫弓形虫疫苗的规模化猪场（编号A、B、C、D、E），随机采集外表健康母猪的前腔静脉血液样品321份，其中A场76份、B场83份、C场67份、D场45份、E场50份。现场询问该场猪群有无猫接触史，有无灭鼠措施，是否进行过抗虫药物预防。

1.2 待检血清制备

按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血，无污染。血清样品保存时间在1周内的，置于2～8 ℃冰箱保存，保存时间超过1周的，置于-20 ℃冰箱保存。冰箱内保存的血清样品应恢复至室温并混匀后再进行抗体检测。

1.3 诊断试剂及仪器

猪弓形虫IgG抗体诊断试剂盒：购自深圳芬德生物技术有限公司；Bio-Rad 9602型全自动酶标仪。

1.4 检测方法及结果判定

采用酶联免疫吸附（ELISA）法，按试剂说明书进行检测。样品A450值大于0.18判为阳性，小于0.18判为阴性。

1.5 统计学方法

采用SPSS 17软件进行统计学分析，组间比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 总体检测情况

徐州市5个规模化猪场的母猪均存在弓形虫血清IgG抗体，场抗体阳性率为100%；321份血清中，检出阳性189份，样品阳性率为58.9%（189/321）。其中，A场抗体阳性率最高，为67.1%（51/76），C场阳性率最低，为38.8%（26/67）。具体结果见表1。

表1 5个猪场弓形虫抗体检测情况

2.2 不同胎次母猪检测情况

7胎及以上母猪的弓形虫抗体阳性率最高，为63.6%，其次为1～2胎母猪，阳性率为63.0%，3～4胎最低，为46.5%。具体结果见表2。

表2 不同胎次母猪弓形虫抗体检测情况

2.3 有无灭鼠措施猪群检测情况

未采取灭鼠措施的A、B、E场平均个体抗体阳性率为64.1%，采取灭鼠措施的是C、D场平均个体抗体阳性率为49.1%，差异有统计学意义（P＜0.05）。具体结果见表3。

表3 有无灭鼠措施母猪群抗体检测情况

2.4 有无药物预防措施猪群检测情况

5个猪场中，只有C场做过磺胺类药物预防，个体抗体阳性率为38.8%，A、B、D、E场均未做过药物保健，个体抗体阳性率为64.2%，差异有统计学意义（P＜0.05）。具体结果见表4。

表4 有无药物预防措施猪群抗体检测情况

3 分析与讨论

猪感染弓形虫后不表现临床症状，但可终身带虫，其是否发病取决于虫体毒力、感染数量、感染途径及宿主抵抗力等，一旦发病可造成猪成批死亡，给养猪业带来重大经济损失。因此猪弓形虫病监测对养猪业健康发展意义重大。

本次弓形虫IgG抗体检测采用的是商品化弓形虫病ELISA诊断试剂盒。目前，应用于猪弓形虫病检测的方法有多种，包括病原学诊断、免疫学诊断、分子生物学诊断，其中最可靠的是病原学诊断。但病原学诊断方法敏感性低，症状轻微或即将耐过的病猪，以及使用磺胺类药物治疗过的病猪不易检出弓形虫，容易导致漏检，并且该方法在染色镜检和病料采集时存在局限性，而且费时费力。免疫学诊断方法是利用弓形虫感染猪体后在猪体内释放的循环抗原（弓形虫代谢或者裂解产物）或者产生的抗弓形虫抗体进行检测诊断，包括间接荧光抗体试验（IFAT）、Sabin-Feldman染色试验（SFDT）、间接血凝试验（IHAT）、改良凝集试验（MAT）、金标免疫层析法、酶联免疫吸附试验（ELISA）等。其中，ELISA是弓形虫病诊断检测的最常用方法。杨亚晓等[3]比较金标法、IHAT和ELISA，发现ELISA检测弓形虫 IgG 抗体的敏感性和特异性较高，适合于大规模的弓形虫 IgG 抗体筛查。罗才庆等[4]对 ELISA和IHAT比较发现，ELISA更适用于猪弓形虫抗体检测。因此本研究采用了弓形虫病ELISA诊断试剂盒。

由于被检测猪场均未进行弓形虫疫苗免疫，因此血清IgG抗体阳性就表明已经感染了弓形虫。本次检测发现，徐州市5个猪场均存在弓形虫血清IgG抗体阳性，个体阳性率达58.9%，表明5个猪场的母猪存在较严重的弓形虫感染。经临床检查，被检测母猪均未表现弓形虫感染症状，属于隐性感染。文献查阅发现，关于徐州市猪弓形虫血清学调查的报道较少。孔猛等[5]对江苏省部分地区动物弓形虫病进行血清学调查，发现徐州市睢宁县育肥猪弓形虫阳性率为11.1%。而国内其他地区有关母猪弓形虫血清学调查的报道较多。华利忠等[6]报道黑龙江、辽宁、河北和山西的母猪弓形体阳性率分别为63.24%、52.55%、50.92%和45.45%。杨娜等[7]采用改良凝集试验（MAT），对从辽宁省沈阳、辽阳、大连等14市采集的2 152份血清进行弓形虫抗体检测，发现繁殖母猪阳性率为33.9%，普遍高于育肥猪（13.4%）。邵晓冬等[8]采集河南洛阳地区规模化养殖场和散养户母猪、育肥猪、保育猪的血清样品410 份，应用 ELISA 方法检测弓形虫IgG 抗体，发现母猪弓形虫血清抗体阳性率达35.4%，育肥猪和保育猪的阳性率分别是34.5% 和22.2%。邵金龙等[9]对厦门市部分猪场猪弓形虫感染情况进行血清学调查，发现35日龄猪的阳性率为22.02%，90日龄猪的阳性率为31.41%，哺乳母猪的阳性率为67.52%，各猪场不同日龄猪都有一定程度的弓形虫感染，且哺乳母猪感染率最高。虽然抗体检测方法不同会造成结果不同，但上述报道中的母猪弓形虫抗体阳性率与本次检测结果基本一致，阳性率大多在35%～60%之间，表明弓形虫感染在母猪群中普遍存在。

国内多数报道认为，弓形虫IgG抗体阳性率随母猪胎次增加而上升。华利忠等[6]报道东北及华北地区猪弓形虫IgG抗体阳性率从后备母猪的22.73%上升到6胎次母猪的75.24%。鹿双双等[10]针对东北、华北地区22个猪场的657份样本，采用间接ELISA的方法进行猪弓形虫抗体检测，发现2胎次以上母猪阳性率明显高于后备母猪及1胎次母猪。本次抗体检测结果显示，1～2胎次的阳性率反而高于3～6胎次，这可能与各胎次的样本容量存在差异有关。

目前商品化弓形虫疫苗主要针对绵羊和山羊，而针对猪、猫和人的弓形虫疫苗依然较为缺乏[11]，因此药物预防仍是弓形虫病防控的重要措施。本次检测发现，做过磺胺类药物预防的母猪抗体阳性率明显偏低，因此经产母猪使用药物来预防和净化弓形虫十分必要。猪的年龄、性别、饲养条件，以及外界环境中是否有猫、鼠类等多种因素都可影响猪弓形虫感染[12]。本次抗体检测发现，猪场内控制啮齿动物活动，实施灭鼠措施母猪的弓形虫抗体阳性率远低于无灭鼠措施母猪，说明控制弓形虫感染风险因素对于弓形虫病防控具有重要意义。C场的抗体阳性率明显低于其他猪场。分析发现，只有该场既采取了灭鼠措施，又进行了磺胺类药物预防，由此也例证了这些措施综合运用的有效性。