蒋国君,刘亚明,王道鑫,赵婉晨,童旭辉

(安徽省生化药物工程技术研究中心,蚌埠 233030;*通讯作者,E-mail:bbmctxh@126.com)

乳腺癌是严重危害女性健康的恶性肿瘤之一,其发病率位居女性恶性肿瘤的首位,并以每年2%的速度递增[1]。目前乳腺癌的治疗措施以手术为主,配合化学、内分泌及免疫治疗[2]。顺铂是治疗实体肿瘤的经典药物,但近年来在临床上的应用受限,主要原因是患者长期使用顺铂后,肿瘤细胞对其产生耐药性[3]。黄芩素属于天然的黄酮类化合物,有研究表明,黄芩素可以抗肿瘤,如抑制肝癌细胞、前列腺癌细胞等增殖[4]。本课题组前期研究也表明,在正常睾丸支持细胞中,低剂量的黄芩素可以增加顺铂的毒性[5]。那么,黄芩素是否也可以增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性呢?因此,本研究采用对乳腺癌MCF-7细胞无毒的黄芩素浓度联合顺铂诱导MCF-7的增殖及凋亡,观察对顺铂抗乳腺癌作用的影响,并且初步探讨其机制,以期为顺铂在临床的扩大应用提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 细胞株及主要试剂

细胞系MCF-7(购于中国科学院细胞库)。MEM培养基(Gibco公司,美国),胎牛血清(四季青公司),顺铂(Cisplatin)、胰蛋白酶(Typsin)、MTT、二甲基亚砜(DMSO)均购于Sigma公司(美国),BCA蛋白定量试剂盒(碧云天公司),兔抗人Bcl-2抗体,兔抗人Bax抗体,鼠抗人β-actin(abcam公司，英国)。

1.2 细胞培养

人乳腺癌细胞MCF-7采用MEM高糖培养基,含有10%胎牛血清,100 U/ml青霉素,100 mg/L链霉素,37 ℃、饱和湿度、5% CO2培养箱中培养。细胞常规培养于培养瓶中,0.25%胰蛋白酶溶液消化传代,1周传代2-3次,传代比例约为1 ∶3。

1.3 MTT法检测细胞存活率

将细胞按5×105/ml的细胞密度接种于96孔板,每孔200 μl,每组药物浓度设5个复孔,另设阴性对照组(不加顺铂或黄芩素)和空白对照组(不加细胞,只加培养基)。……