顾冰宁 刘 欣 沈和定 王冬凤 杨铁柱 朱 敏 史艳梅 李柏航



瘤背石磺肌球蛋白重链()基因的克隆与表达分析*

顾冰宁#刘 欣#沈和定①王冬凤 杨铁柱 朱 敏 史艳梅 李柏航

(上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室 水产科学国家级实验教学示范中心 海洋动物系统分类与进化上海高校重点实验室 上海 201306)

肌球蛋白是动物体内重要的功能性马达蛋白，调控机体的信号传导、肌肉收缩和细胞器运动，为探究肌肉在瘤背石磺()由海洋向陆地进化过程中发挥作用的分子机制，实验以石磺科4种贝类转录组数据为基础，采用RACE方法从瘤背石磺肌肉中首次克隆到肌球蛋白重链(Myosin heavy chain,)基因cDNA的全长并进行组织表达分析。研究结果显示，瘤背石磺基因cDNA全长为7566 bp，包括5895 bp的开放阅读框，228 bp的5¢端非翻译区，1443 bp的3¢端非翻译区，共编码1964个氨基酸。预测该基因编码的蛋白质由31713个原子组成，分子式为C9765H15897N2849O3150S52，分子量约为225.28 kDa，理论等电点为5.56，N端信号肽具有29个氨基酸长度。瘤背石磺具有2个保守结构域MYSc_class_Ⅱ和Myosin_tail_l，且亲水性氨基酸集中在Myosin_tail_l区。系统进化树分析显示，瘤背石磺与光滑双脐螺()的亲缘关系最近。RT-PCR结果显示，基因在各个组织中均有表达，腹足和背部皮肤表达量最高，腹部皮肤、口球、肺囊中高表达，肝胰腺、蛋白腺、两性腺中微量表达(<0.05)。基因在瘤背石磺的主要运动器官腹足中高表达，说明肌肉运动对瘤背石磺湿地环境的两栖适应性具有至关重要的作用。实验结果为今后进一步研究瘤背石磺肌球蛋白重链基因进行原核表达及多克隆抗体的制备奠定了良好基础，更为深入探讨海洋无脊椎动物从海洋向陆地进化的研究提供有参考意义的分子依据。

瘤背石磺；；基因克隆；组织表达

瘤背石磺()是生活在潮间带高潮区滩涂的一种肺螺类，隶属于软体动物门(Mollusca)、腹足纲(Gastropoda)、肺螺亚纲(Pulmonata)、石磺科(Onchidioidea)，是一种具有重要营养价值和药用价值的两栖性贝类，广泛分布于赤道两侧的热带和亚热带海区(吴旭峰等, 2010)，国内主要分布在江苏以南沿海地区。……