刘雨诗， ， ， ， *， *

(1.西北农林科技大学动物科技学院 草业科学系， 陕西 杨凌712100； 2. 陕西省草原工作站， 陕西 西安710016；3. 陕西省林业科学研究院， 陕西 西安710082)

1 材料与方法

1.1 试验材料

本研究采用保定紫花苜蓿(MedicagosativaL. ‘Baoding’)种子为供试材料，由中国农业科学院北京畜牧兽医研究所提供。经1% NaClO消毒后置于铺有湿润滤纸的9 cm培养皿中，保持滤纸湿润，发芽5 d后移至西北农林科技大学草业温室中培养(温度：昼/夜 30±5℃ / 20±5℃; 湿度：昼/夜 55±5% / 70±5%)。幼苗处理分为2组：接种苜蓿专用根瘤菌多萌(Rhizobiummelilotistrain Dormal)的紫花苜蓿(AN)和不接种根瘤菌的紫花苜蓿(NN)。AN浇改良霍格兰氏无氮营养液，NN浇全氮营养液[27]以确保其正常生长。本课题组前期研究发现，接种根瘤菌苜蓿AN和无根瘤菌苜蓿NN的氮含量，碳含量，以及磷含量无显著差异[28]。生长60 d的幼苗进行第一次刈割，90 d后进行第2次刈割，到120 d时，进行低温胁迫试验。

1.2 低温处理

当苜蓿幼苗生长到120 d后，随机选择AN和NN苜蓿，放入植物培养箱进行-6℃低温处理12 h。

1.3 样品采集

紫花苜蓿地上部分和地下部分分别采样，共设置7个采样时间点，分别为低温胁迫0 h，2 h，4 h，6 h，8 h，10 h，12 h时进行采样。试验设置3次重复。除电导率与叶绿素指标使用鲜样外，其余指标测定均使用冻样。用锡箔纸包好采集的样品，迅速放入液氮10 min，存放于-80℃冰箱，待后续测量生理指标。

1.4 指标测定方法

1.5 数据分析

试验数据采用SPSS 19.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA)统计软件分析，独立样本t检验进行方差分析，设置相应置信区间百分比95%。使用GraphPad Prism 5作图。

2 结果与分析

2.1 紫花苜蓿根际状态

不同处理下紫花苜蓿的根际结瘤状况不同，其中AN根部有粉色根瘤，而NN根部无根瘤(见图1)。……