p75神经营养素受体在小鼠坐骨神经挤压伤后的表达变化特点
2018-08-20,,,
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(1 临沂市人民医院,山东 临沂 276003;2 山东医学高等专科学校)
p75神经营养素受体(Neurotrophin receptor,NTR)作为肿瘤坏死因子受体超家族的成员之一,在神经修复中发挥关键作用。神经营养素与p75NTR结合,可以调控不同的信号通路,介导细胞的存活、分化、生长和凋亡[1-2]。p75NTR生物学功能取决于配体的生物学特性、与配体结合后的相互作用、蛋白水解处理过程和激动的信号传导途径等因素[3]。在周围神经损伤时,p75NTR表达与神经再生和神经保护有着密切的关系。目前,对于周围神经损伤后p75NTR表达变化特点尚不清楚,本研究通过观察小鼠坐骨神经挤压伤后不同时间点p75NTR表达水平,以探讨其表达变化特点。
1 材料和方法
1.1实验动物及分组 选取野生型健康雄性C57BL/6小鼠42只,8~10周龄,体重22~25 g,购于北京维通利华实验动物技术公司,许可证号SCXK (京) 2012-0001。小鼠饲养环境为层流环境,保持环境温度在22~24 ℃,相对湿度在50%~60%,光控周期12 h,给光时间7:00-19:00。将实验小鼠随机分为假手术组及模型组,各21只。模型组根据成模时间分为成模前、成模后0、3、7、14、21、28 d等7个时间点,每个时间点各3只。
1.2主要实验试剂 异氟烷(上海雅培制药有限公司);TRIzol(Invitrogen,美国);PrimeScript 逆转录试剂盒和SYBR 实时荧光定量试剂盒(TaKaRa,日本);RIPA裂解液、BCA蛋白浓度测定试剂盒、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(碧云天生物公司);Anti-GAPDH抗体、兔抗鼠p75NTR抗体、HRP标记山羊抗兔IgG、HRP标记山羊抗鼠IgG(abcam,美国)。氯仿、异丙醇及无水乙醇等均为国产分析纯。
1.3动物模型制备 实验小鼠采用异氟烷吸入麻醉(2%异氟烷+98%氧),按照文献[4]报道使用钳夹法制作小鼠坐骨神经挤压伤模型。……
