孙凤俊 焦子康 薛建华 宣柏华 张佳谊

1 材料与方法

1.1 供体母牛选择 供体母牛是位于北京市怀柔区的和牛生物科技（北京）有限公司饲养的空怀和牛，年龄为三四岁。

1.2 药品与器械 促卵泡素（FSH）（贝尔尼奇公司FOLLTROPIN-V，400 mg NIH/瓶），黄体酮缓释剂阴道栓CIDR（新西兰DEC国际有限公司，黄体酮1．38 g/支），氯气前列烯醇（齐鲁动物保健品公司，0．322 g/支），黄体酮（P4）注射液（宁波市三生药业有限公司，2 mL∶50 mg/支）；苯甲酸钠雌二醇（EB）注射液（宁波市三生药业有限公司，2 mL∶4 mg/支）；冲卵液自配（含有10%FCS的PBS液），胚胎保存液及冷冻保护液均购自贝尔尼奇公司，采卵管为二路式采卵管（规格为18#）和集卵杯购自富士平公司。

1.3 超排方法与胚胎采集

1.3.1 超排处理方法 供体和牛超数排卵处理与胚胎采集于2017年3-4月在北京市怀柔区和牛生物科技（北京）有限公司和牛养殖场进行。供体牛超数排卵处理采用阴道栓+促卵泡素+PG方法进行。超数排卵具体方法：在发情周期任意一天上午给供体牛放置阴道栓，同时肌肉注射黄体酮注射液（P4）100 mg和苯甲酸钠雌二醇注射液（E2）2 mg，放栓当日为0 d，第5～8 d超排处理按着每天2次递减量肌肉注射Folltropin-V。促卵泡素采用Folltropin-V，连续4 d共8次递减剂量注射方法，每头供体牛超数排卵注射Folltropin-V总剂量分别为200、240、250、260 mg 4个组别[1]。

1.3.2 人工授精 供体牛放栓后第9 d早晚观察发情，站立发情后12 h进行第1次人工授精，精液为和牛常规冷冻精液，间隔12 h进行第2次输精。每次1支冻精，输精部位子宫体。

1.3.3 胚胎采集与质量鉴定 供体牛超排发情后第7 d（发情当天为0 d）采用非手术法采集胚胎。每侧子宫角使用250 mL左右冲卵液回收胚胎，反复冲洗六七次，回收液在集卵杯中，冲胚后，子宫内灌注25～30 mL碘甘油，并肌肉注射2支氯前列烯醇。……