涂其武，沈晓黎

(南昌大学第二附属医院， 江西 南昌 330000)

恶性脑肿瘤(主要为神经胶质瘤)占颅内肿瘤的40%～50%。近20年来，胶质瘤患者的中位生存期无明显改善，以各种疗法均难以达到根治程度，几乎毫无例外地迟早要复发[1]。最近几年，细胞分子机制的深入研究成为有效治疗肿瘤的关键。自1993年发现miRNAs，现已发现1 000多种miRNAs。miR- 34家族为近年来备受关注的miRNA之一，miR- 34a是其中一种且其作用机制已经明确[2]。目前已有研究证实，肿瘤细胞内miR- 34a的表达异常与细胞增殖及凋亡相关。在神经母细胞瘤中，染色体1p的杂合缺失导致miR- 34a表达减少，进而引起肿瘤异常增殖及侵袭能力减弱[3]。另外，miR- 34a可以通过AKT和Wnt信号通路抑制脑胶质瘤细胞增殖[4]。

目前研究证实，在许多肿瘤中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)都呈高表达，与肿瘤侵袭迁移密切相关，且是Wnt信号通路下游靶基因[5- 6]。在预测miRNA靶基因数据库中，发现MMP2是miR- 34a潜在的靶基因。MMP2与miR- 34a在脑胶质瘤细胞中侵袭和迁移的研究未见报道，其机制尚不清楚。本研究中，为了证实miR- 34a是否通过MMP2影响脑胶质瘤细胞的生物学功能，检测脑胶质瘤细胞株中miR- 34a及MMP2的表达情况，并且观察miR- 34a及MMP2对脑胶质瘤细胞侵袭迁移的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

脑胶质瘤细胞系A172、U251、U373、 U87及人正常脑胶质细胞(HEB)(ATCC公司)；胎牛血清和DMEM培养液(Gibco 公司)；LipofectamineTMLTX and Plus Reagent(3000) 转染试剂盒(Invitrogen 公司)； Trizol(RNA提取试剂盒)、PrimeScriptTMRT reagentKit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)和SYBR® Premix Ex TaqTM(Tli RNaseH Plus)试剂盒(大连宝生物工程有限公司);一步法RT反转录试剂盒及大肠杆菌DH5α感受态细胞(TaKaRa公司)；microRNA提取试剂盒、反转录及荧光定量试剂盒(北京诺博莱德科技有限公司)；……