居冠军，施民新*，陆海敏，毛清华，许 峰，汪志文，薛 群

(1.南通大学附属肿瘤医院 胸外科， 江苏 南通 226361；2.南通大学附属医院 胸外科， 江苏 南通 226001)

肺癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤，在许多国家，肺癌已经是癌相关性死亡的最主要的原因[1]。SOX(SRY-like HMG box)是一类具有特征性HMG(hight mobility group, HMG)DNA结合区域的转录因子家族。作为癌基因，SOX2在多种癌组织包括胃癌、乳腺癌、非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)和神经内分泌性癌表达增高并发挥促癌作用[2]。

羧基末端结合蛋白(COOH-terminal binding protein，CTBP)是由CTBP1基因和CTBP 2基因分别编码产生的CTBP1和CTBP2两种蛋白[3]。CTBP1在促进上皮间质转换中有重要作用，并抑制黏附分子E-cadherin的表达，肿瘤细胞间的黏附减少，更容易发生转移，这点已在多种肿瘤中被证实[4]。在非小细胞肺癌中，CTBP1通过多种途径参与到肺癌的发生发展过程，并促进肿瘤细胞的转移[5-6]。然而目前的研究并未指出CTBP1促进肿瘤转移的具体机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本：本组非小细胞肺癌石蜡标本114例及新鲜配对组织标本，均由南通市肿瘤医院提供。标本来自2013年7月至2015年7月在南通市肿瘤医院胸外科所实行的肺癌根治术，术前未行放化疗。病理诊断明确，临床病理资料完整。年龄39～77岁；肺癌直径<3 cm 55例，≥3 cm 59例；组织学高分化13例，中分化76例，低分化25例；鳞癌54例，腺癌43例，其他类型癌17例。新鲜配对组织标本8对，新鲜组织离体后冻存于液氮中，随后保存于-80 ℃冰箱内，以便提取组织蛋白。本研究经南通市肿瘤医院医学科学研究伦理委员会批准，并取得所有涉及此项研究患者的知情同意。

1.1.2 细胞及试剂：人类肺癌细胞系H1299(中国科学院细胞库上海保藏中心)；兔抗人SOX2、CTBP1、Snail多克隆抗体(Abgent公司)；兔抗人GAPDH多克隆抗体(Santa Cruz公司)；Envision免疫组化检测试剂盒(GBI公司)，含有Polymer Helper(即用型，试剂1)、HRP标记的小鼠抗兔IgG(即用型，试剂2)。本研究中所使用的siRNA由上海吉玛基因公司合成。

1.2 方法

1.2.1 Western blot 检测SOX2、CTBP1、Snail蛋白表达：按照蛋白裂解液说明书提取组织蛋白，测定蛋白浓度，加入4×蛋白上样缓冲液混匀，沸水处理6 min，快速降至室温后上样，进行SDS-PAGE凝胶电泳。……