(开封市妇幼保健院，河南 开封 475002)

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus, GDM)指妊娠期间发生或者首次发生的不同程度的葡萄糖不耐受，但不排除妊娠前存在糖代谢异常的可能[1,2]。妊娠期糖尿病导致胎儿呼吸窘迫综合征症和巨大胎儿等并发症增加，其治疗先以运动饮食为主，如控制严重不佳再给予胰岛素干预。MTNR1A等不同基因多态性与GDM发病相关[3]。该病发病机理未阐明，DNA和RNA编辑修复功能基因多态性与其有一定相关性。本研究旨在通过检测妊娠期糖尿病和正常产妇胎盘中ADAR2的表达情况，并分析运动饮食治疗和胰岛素治疗的胎盘表达ADAR2是否有明显差异，报告如下。

1 资料与方法

1.1 免疫组化

收集妊娠糖尿病产妇的胎盘组织，按照传统方式进行组织石蜡切片制作，脱蜡后复染色。ADAR2表达以细胞质内出现棕黄色颗粒为判定阳性细胞的标准，随机选取5个400倍视野观察记录。评分标准0为阴性，1～4分为弱阳性(+)，5～8分为阳性(++)，9～12分为强阳性(+++)。

1.2 光学显微镜和透射电镜观察细胞形态

通过倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞形态学变化并照相。收集培养的细胞用4℃预冷的2%戊二醛固定2 h，再用0.1M二甲砷酸钠缓冲液换液三次，每次2 h。之后用1%锇酸4℃固定2 h，用0.1M二甲砷酸钠缓冲液换液二次，每次15 min。接着梯度酒精脱水，环氧丙烷渗透，包埋，制备超薄切片，透射电镜观察细胞超微结构。

1.3 Western bolt

利用RIPA Buffer 裂解液提取各组细胞总蛋白，取20μL各组已处理的蛋白样品进行SDS-PAGE电泳并在恒流200 mA，冰水浴条件下电转60 min转移至PVDF膜上，5%的脱脂奶粉封闭液完全封闭1 h，以封闭液按1∶1 000稀释乙抗体，将上述PVDF膜浸泡其中孵育3 h后，用TBST溶液洗膜，然后与1∶8 000稀释的二抗孵育1 h后利用ECL试剂盒化学发光显色。……