杨向会 陈 晟 吴 敬

(1. 江南大学食品科学与技术国家重点实验室，江苏 无锡 214122；2. 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122；3. 江南大学教育部食品安全国际合作联合实验室，江苏 无锡 214122)

普鲁兰酶是一种脱支酶，能够专一地水解支链淀粉(或普鲁兰多糖等相关聚合物)中α-1,6-糖苷键[1]，所以普鲁兰酶在淀粉加工工业得到了广泛的应用。普鲁兰酶与淀粉水解酶(α-淀粉酶、β-淀粉酶)复配使用时，淀粉质原料的利用率明显提高，对节约成本和提高产物转化率有重要意义，因此普鲁兰酶是淀粉加工中不可或缺的非大宗关键酶制剂[2-3]。

早期国内外有关普鲁兰酶的研究主要集中在菌株的筛选上[4-6]，许多产普鲁兰酶的微生物被发现，但由于多数的野生菌株发酵产普鲁兰酶的酶活较低，限制了其在工业上的应用。因此，对野生菌来源的普鲁兰酶在工程菌中进行异源表达，以提高蛋白表达量，成为目前研究主流。至今已从多种微生物中克隆出普鲁兰酶基因并对其进行异源表达[7-8]，但重组后的普鲁兰酶表达仍存在产量低或不能有效分泌的问题。为解决此类问题，Duan等[9]通过分阶段控制发酵温度和添加甜菜碱的方法，使普鲁兰酶的可溶性表达量和胞外分泌得到显著提高。Zou等[10]通过流加甘氨酸使普鲁兰酶的胞外酶活提高了22.6倍。来源于Bacillusacidopullulyticus的普鲁兰酶具有良好的酶学性质(耐酸，耐热)，最适温度60 ℃，最适pH 5.0，可以和多种淀粉水解酶复配使用，能够满足淀粉工业应用的要求。……