萨出拉　那生桑

(1.内蒙古医科大学，内蒙古　呼和浩特　010110;　2.内蒙古国际蒙医医院，内蒙古　呼和浩特　010110)

松萝为松萝科植物长松萝Usnea longissima Ach.或节松萝Usnea diffracta Vain.的丝状体。是蒙医常用药材，蒙药名为斯日古德、阿拉坦-乌塔斯-乌布斯，以全草入药[1]。蒙药松萝味苦，性凉，效钝、软、柔；具有清热、解毒之功效，主治毒症，腹鸣，泄泻，肠热，筋腱疼痛，肺脓疡等[2]。蒙医药多部文献均有记载。如《认药白晶鉴》记：“缠绕于松树，生于草滩沟岸灌丛中”。《无误蒙药鉴》则曰：“该条所植物形状似菟丝子，但菟丝子为有花植物，不符《认药白晶鉴》所述形态特征”该条所植物形状似菟丝子，但菟丝子为有花植物，不符《认药白晶鉴》所述形态特征。《中国医学百科全书·蒙医学》、《蒙药志》等近代蒙医药书籍均认为松萝为正品，故认定历代蒙医药文献所载的斯日古德即阿拉坦-乌塔斯-乌布斯为我们所说的松萝[3-5]。现代药理学研究表明，具有抗菌、抗氧化、抗肿瘤、解热镇痛等作用[6-9]，其主要含有巴尔巴地衣酸地弗地衣酸 、松萝酸 、地衣聚糖 、长松萝含有多糖 、扁枝衣酸乙酯等[10]。本文对药材的性状及纤维特征进行考证，并对其所含的松萝酸进行了含量测定，从而为蒙药松萝饮片的生药学鉴定及含量测定提供可靠的实验数据。

1　实验材料

1.1仪器设备LC-20A型岛津高效液相色谱仪(日本)；AL204型电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；AB135-S型电子天平(METTLER TOLEDO Made in Switerland)；JA5003N型电子分析天平(上海菁海仪器有限公司)；ZF-I型三用紫外分析仪器(上海古村电光仪器厂)；薄层板为自制硅胶GF254板。

1.2试剂与试药松萝(市场购置，批号20151012和20151227；河北购置，批号20160715)经由内蒙古医科大学渠弼教授鉴定为节松萝Usnea diffracta Vain.干燥的全草。松萝酸(批号15120506，含量>98%，购自北京中科仪友化工技术研究院)。乙腈、甲醇为色谱纯；超纯水；其他试剂为分析纯。

2　方法与结果

2.1药材定性分析

2.1.1性状鉴别本品为地衣体丝状，较粗壮，淡灰绿色或淡黄棕色。枝体表面有多数环状裂沟。横断面可见中央有线状强韧性的重轴，具弹性，由菌丝组成；其外为藻环，常有环状沟纹分离成短筒状。

2.1.2显微鉴别本品粉末灰绿色。菌丝线状成束，无色，直径6～12μm。藻细胞类圆形成群，含叶绿体，呈绿色，直径8～15μm。如图1。不同批次样品均显此特征，故将此特征作为蒙药松萝饮片的粉末特征。

2.1.3薄层鉴别取松萝粉碎(过5号筛)或松萝粉5.0g，置索氏提取器内，加三氯甲烷适量，加热回流提取4h，提取液浓缩后，转移至25mL量瓶中，用三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取松萝酸对照品，用三氯甲烷配制成每1mL含1.0mg制成对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版通则0502)试验，吸取上述2种溶液各5μL，分别点于同一含羧甲基纤维素钠的硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-苯-冰乙酸(7:2:1)为展开剂，饱和1h展开，取出，热风吹干，置紫外灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。如图2。不同批次样品均有此特征，故将本方法作为蒙药松萝饮片薄层鉴别方法。

2.2检查由于本品为全草类药材，在采集和运输过程中易带入泥沙、尘土等非药用部分，同时容易受到干燥或潮湿环境的影响，故对药材的水分、总灰分进行限度检查，以控制药材的纯度。

2.2.1水分照《中国药典》(2015版四部通则0832 第二法)进行水分测定。

取3批样品，每批约2～5g，平铺于干燥置至恒重的扁型称量瓶中，厚度不超过5mm,疏松供试品不超过10mm，精密称定，开启瓶盖在100～105℃干燥5h，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30min，精密称定，至连续2次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算样品的含水量。结果表明，3批样品水分含量在9.71%～9.82% ，均值为9.76% ，故规定蒙药材松萝水分含量不得过11%。结果如表1。

表1　松萝水分含量测定

2.2.2灰分照《中国药典》(2015版四部通则2302)进行总灰分测定。

取三批样品，每批约5g(通过2号筛)，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量，缓缓炽热，至完全炭化，逐渐升温至500～600℃，使完全灰化并至恒重，根据残渣量，计算样品种总灰分的含量0.972(%)。结果表明，3批样品总灰分含量在0.966%～0.982%之间，平均值为0.972；故规定蒙药材松萝总灰分不得过1.2%，结果如表2。

表2　松萝总灰分含量测定表

2.3浸出物的测定照醇溶性浸出物测定法《中国药典》(2015年版 四部通则2201)热浸法测定，用乙醇作溶剂。

3批样品的乙醇浸出物在4.19%～4.58%之间，平均值为4.42%。故规定蒙药松萝醇溶性浸出物(热浸法)不得少于3.50% ，结果如表3。

表3　松萝醇溶性浸出物测定结果

2.4含量测定松萝中含有多种有效成分，如松萝酸(usnic acid)、地弗地衣酸(diffractaic acid)、巴尔巴地衣酸、脂肪酸、多糖等化合物。松萝酸又名地衣酸，具有旋光性，在地衣中发现(+)及(-)2中形式[11]。松萝酸易溶于丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷甲醇混合液中[10]，还有文献报到以甲醇为溶剂，取得了较好的提取效果[12]。松萝因此本实验选择了色谱甲醇从松萝中提取松萝酸，比此方法提取量最多且操作简便。

2.4.1色谱条件Packed Column 5C18分析住(4.6×250mm ,5μm)；柱温30℃；检测波长：254nm；进样量：10μL；流动相：乙腈(A), 5%冰乙酸 (B)，分析柱流动相比例：A:B=78:22；流速：1mL/min。

流动相的选择：对流动相甲醇-水(85:15)、乙腈：25%乙酸溶液(78:22)进行实验筛选。结果表明，以乙腈：25%乙酸溶液(78:22)为流动相色谱峰形理想、分离度好。但有些拖尾，因此考察了不同浓度的乙酸溶液(25%、20%、10%、5%、1%乙酸溶液)，发现流动相以乙腈：5%乙酸溶液(78:22)时不拖尾、保留时间短、峰纯度好，故选择该流动相。

2.4.2溶液的制备

2.4.2.1供试品溶液的制备供试品提取溶液的选择：分别做了乙酸乙酯热回流提取、丙酮超声提取及色谱甲醇超声提取，结果表明，色谱甲醇提取最为有效的溶剂，此方法提取量最多且操作简便。

取本品粉末(过5号筛)约0.1g，精密称定，置于具塞100mL锥形瓶中，精密加入60mL色谱甲醇，密塞，超声处理(功率300W，频率40kHz)20min，放冷5min，过滤，取续滤液即可。

2.4.2.2对照品溶液的制备取松萝酸对照品适量，精密称定，加色谱甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，摇匀，即可。

2.4.3系统适用性试验在上述色谱条件下精密吸取对照品溶液10μL,注入液相色谱仪，记录峰面积。松萝酸的浓度为(0.5mg/mL)。松萝酸与杂质峰分离效果较好，理论塔数以松萝酸峰计算为3000，实验结果见图3～6。

2.4.4线性关系考察取松萝对照品，制成浓度分别30、40、50、100、150、250μg/mL的溶液，依次进样10μL，记录峰面积，以对照品的浓(μg/mL)峰面积纵坐标，可见松萝酸在30-250μg/mL范围内，得到松萝酸线性回归方程Y=12938X-237883，R2=0.9999，线性关系良好，见图7。

2.4.5精密度试验取样品溶液进样10μL，记录峰面积，重复操作5次，记录峰面积.结果RSD≤2.4%，表明仪器精密度良好。

2.4.6重复性试验取5份同一供试品溶液(批号：20151227)，依次各取溶液10μL进样(过滤后)，记录峰面积，结果RSD≤2.18%，表明本法重复性较好。

2.4.7稳定性试验取同一批次样品，依次在0h、2h、4h、8h、10h、12h下取溶液(过滤后)进样10μL，记录峰面积，以峰面积计算RSD。结果 RSD≤3.81%，表明供试品在12h内稳定。

2.4.8加样回收试验考察精密称取供试品溶液6份(0.025g)，分别置于,6个相同规格的容量瓶中，各加入15mL色谱甲醇，再精密加入松萝酸对照品，超声20min，放冷，过滤，按含量测定方法精密吸取10μL进样，记录峰面积，计算出含量、回收率以及RSD。结果如表4,平均回收率为100.8 %，RSD为1.15% ,表明本方法准确可靠。

表3　松萝醇溶性浸出物测定结果

2.4.9样品含量测定精密吸取不同批次样品的供试品溶液各3份，每份注入10μL,按上述同样条件测定。结果如表5，松萝酸含量在7.23%～7.49 %之间，平均含量为7.44%，故规定松萝中松萝酸的含量不得少于6.0%。

表5　松萝含量测定结果(n=3)

3　讨论

在松萝酸含量测定研究中对流动相和供试品提取溶液进行了平行对照选择，结果：流动相以乙腈：5%乙酸溶液(78:22)时不拖尾、保留时间短、峰纯度好，故选择该流动相。供试品提取以色谱甲醇提取最为有效的溶剂，此方法提取量最多且操作简便。

松萝作为蒙医常用的药材，其饮片入味于多种复方制剂，虽然关于其质量研究报道，但在蒙医药饮片领域的质量标准研究尚未报道。并且节松萝研究至今空白，因此本实验主要研究的是节松萝。本研究参考《中国药典》(2015年版一部)，结合松萝蒙医药用药特点，从饮片的性状、显微、水分、总灰分、浸出物、松萝酸含量等方面进行了研究，并初步拟定了其质量控制范围，建立了较为完善的质量标准草案，为保证松萝饮片及其复方制剂的临床疗效的均一性和稳定性提供了较为完善的质量标准。