温福利

(福州总医院比较医学科，福州 350025)

兔球虫病是由艾美耳属多种球虫引起的高度感染性、多发性原虫病, 主要寄生于家兔肝胆管或肠上皮细胞。实验兔感染后常出现消瘦、贫血等症状, 严重时会导致死亡[1]。在所报道的兔球虫中, 斯氏艾美耳球虫Eimeria stiedai(E.stiedai)是致病力最强、危害最为严重的兔球虫之一[2]。幼兔接种104个E.stiedai孢子化卵囊，其死亡率可达到40%, 接种105个卵囊, 其死亡率能够达到80%[3], 是我国兰州、重庆、福建等地区兔场流行的优势虫种[4-6]。

兔球虫的检测主要采用直接压片法或饱和盐水漂浮法，但存在误检、漏检现象。核酸检测技术具有高度敏感性和特异性，在医学、食品科学等众多领域得到广泛应用。环介导等温扩增技术(Loop-mediated amplification, LAMP)是近些年兴起的一项新型核酸检测技术[7], 因其特异性强、灵敏度高及检测过程快速准确等特点被广泛应用于生物学的各个领域。目前, 未见应用环介导等温扩增技术检测E.stiedai的报道。本实验根据E.stiedai的ITS1-5.8sRNA-ITS2基因序列设计特异引物(GenBank: JQ328190.1), 通过优化反应条件，建立E.stiedai的LAMP检测方法，为E.stiedai的快速诊断奠定基础。

1 材料与方法

1.1 虫种来源

E.stiedai大型艾美耳球虫(E.magna)和巨型艾美耳球虫(E.maxima)由中国农业大学索勋课题组提供。鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)由福建农林大学殷光文课题组提供。

1.2 仪器和试剂

质粒构建相关试剂及试剂盒(上海生工生物有限公司); DNA恒温扩增试剂盒(广州迪奥生物科技有限公司); H6-1微型电泳槽(上海精益有机玻璃制品仪器厂); FR980凝胶成像系统(上海复日科技有限公司); SMA4000微量分光光度计(merinton); PCR反应扩增仪(美国，Bio-Rad公司); LightCycler480荧光定量PCR仪(瑞士, 罗氏)。……