陶爱恩，张晓灿，李 杨，罗丹丹，段宝忠

（大理大学药学与化学学院，云南大理 671000）

粗茎秦艽（Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.）是传统大宗商品药材，需求量大，为2015年版药典秦艽收载的基原物种之一，被列入《国家重点保护野生药材物种名录》，具有祛风湿、清湿热、止痹痛、退虚热之功效〔1〕。粗茎秦艽在云南已有超过60年的种植历史〔2〕，近年来，对云南栽培粗茎秦艽的质量研究已有报道〔3-7〕，这些研究资料表明，其有效成分与秦艽（G.macrophylla Pall.）相近，抗炎、镇痛效果优于药典收载的另外3种秦艽〔8-9〕，且产量有明显优势〔3，5，8，10〕。因此，大力发展粗茎秦艽栽培是推进秦艽产业可持续发展的必然途径。在研究过程中发现，粗茎秦艽栽培品性状与中国药典秦艽性状描述有差异，一定程度上阻碍了粗茎秦艽药材的市场流通。鉴于此，对粗茎秦艽栽培品及野生品的质量进行比较研究，以期为秦艽质量标准的修订提供参考。

1 仪器、试剂与材料

1.1 仪器与试剂 1200 HPLC高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）、Agilent Zorbax SB C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；KQ-5200DB 型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；GH-252型电子分析天平（A&D，深圳市盛美仪器有限公司）；Nikon E-400显微镜（日本尼康公司）；TS-12D生物组织自动脱水机（上海隆拓仪器设备有限公司）；BM-Ⅶ生物组织包埋机（北京佳源兴业科技有限公司）；QS-Ⅳ生物组织切片机（武汉宏强医疗器械有限公司）；CS-Ⅵ生物组织摊片烤片机（孝感市电子仪器厂）；SmartV250D数字摄像机；OLYMPUSBX-41生物显微镜；Canon EOS 70D数码单反相机。甲醇、乙腈为色谱纯（Fish⁃er Scientific，Fairlawn New Jersey），水为超纯水，其他试剂为分析纯。

1.2 材料 粗茎秦艽样品采集或购于云南、西藏及四川等地，经大理大学段宝忠副教授鉴定为粗茎秦艽（Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk．），凭证标本保存于大理大学中药标本馆，样品信息见表1；对照品购于成都曼斯特有限公司。

2 方法

2.1 性状及显微鉴别 取栽培和野生粗茎秦艽药材，观测药材的形状、大小、颜色、质地、断面、气味等性状特征。采用常规石蜡制片法制作石蜡切片〔11〕，观察横切面组织结构，药材粉碎后观察显微粉末特征。

表1 粗茎秦艽样品表

2.2 浸出物测定 用乙醇作为提取溶剂，参照醇溶性浸出物测定法（《中华人民共和国药典》2015年版通则2201）项下的热浸法测定〔1〕。

2.3 含量测定及指纹图谱数据分析 色谱条件、供试品溶液制备等参照文献〔6〕进行，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004 A版软件分析指纹图谱数据。

3 结果

3.1 药材性状

3.1.1 野生品 呈类圆柱形，上粗下细，扭曲不直，长10～30 cm，直径1～3 cm。表面黄棕色或灰黄色，有纵向或扭曲的纵皱纹，顶端有残存茎基及纤维状叶鞘。质硬而脆，易折断，断面略显油性，皮部黄色或棕黄色，木部黄色。气特异，味苦、微涩。

3.1.2 栽培品 与野生品比较，栽培品较长，支根多。表面颜色较浅，栓皮膜质，易脱落；断面皮部和木部颜色较浅，质地较野生柔韧。野生品及栽培品药材性状见图1。

图1 野生及栽培粗茎秦艽药材性状图

图2 野生品及栽培品根横切显微特征

3.2.2 粉末特征 二者粉末颜色有微小差异，野生品粉末呈暗棕黄色，栽培品粉末呈白色。从显微特征来看，二者无明显差异，见图3。其特征为：栓化细胞较多，淡黄色，表面观呈类多角型、类长方形或不规则形，直径20～180 μm，壁薄，略弯曲，平周壁有横向细纹理，胞腔内含油滴状物。内皮层细胞大，长可达500 μm，多破碎，表面观呈类长方形，侧壁细波状弯曲，平周壁可见纤细的横向线状纹理。导管较多，直径10～50 μm。草酸钙晶体散存于薄壁细胞中。

3.2 显微结构特征

3.2.1 横切面特征 与栽培品相比，野生品外周皮以外的组织多脱落，其他结构特征无明显差异，见图2。可以看出：两者根横切面结构从外到内分别为表皮、内皮层、韧皮部及木质部，中心无髓，射线不明显。根外周皮木栓细胞纵向略延长，内皮层细胞表面观呈类方形，壁近平直；韧皮部宽阔，细胞多呈类圆形，外侧的较大，细胞间隙明显，内侧细胞排列整齐和紧密；形成层明显，由3～4列切向延长的扁平薄壁细胞组成，排列紧密整齐；木质部由不木化木薄壁细胞和木化的导管组成，导管散在或数个成群。

图3 野生及栽培品粉末显微特征图

3.3 化学指纹图谱与相似度 将12批野生品色谱图（样品号CY-1～CY-12）导入中药指纹图谱软件，生成野生品指纹图谱，见图4A。以CY-8号药材图谱作为参照谱进行匹配，生成野生品共有模式指纹图谱，见图4B。将12批野生品及10批栽培品与共有模式指纹图谱比较计算相似度，结果显示，12批野生品和10批栽培品的相似度均大于0.942，见图5，表明二者化学指纹相似度较高。

图4 野生品色谱指纹及共有模式图

图5 栽培及野生品与共有模式图谱比较相似度结果图

3.4 浸出物及含量 研究结果显示，12批野生品及10批栽培品的浸出物含量在27.41%～40.46%之间，平均值33.25%，其中30%以上有20批，占90.90%，全部符合《中华人民共和国药典》2015年版秦艽“浸出物”规定（≥20%）。见表2。

含量测定结果显示，12批野生品及10批栽培品中马钱甘酸和龙胆苦苷总含量在4.15%～16.80%之间，所有样品均符合《中华人民共和国药典》2015年版秦艽“含量要求”（≥2.5%）。10批栽培品的含量在7.42%～13.92%之间，可见栽培品的含量范围较野生品小，表明栽培粗茎秦艽的质量更趋于稳定。

表2 22批样品浸出物及含量测定结果

4 讨论

本研究对粗茎秦艽野生品及栽培品的性状、显微特征、化学指纹、浸出物和含量进行了比较，结果显示二者在显微结构、化学指纹、浸出物和有效成分含量等方面均无明显差异，仅在性状方面有微小差异。生长环境、采挖年限等可能是形成栽培品与野生品性状差异的原因。对照《中华人民共和国药典》2015年版秦艽质量标准，栽培品除性状特征不符合标准外，其他项目均符合要求，且有效成分含量为药典标注的2倍之多。栽培品指纹图谱与野生品共有模式比较，相似度均大于0.942，表明栽培品质量均一。大量的研究已表明无论是栽培还是野生抚育的粗茎秦艽，其药材质量均较好〔3-4〕。粗茎秦艽药材根粗大、较长，色黄，品质较西北出产者为佳〔2〕，产量也具有明显优势。鉴于此，建议秦艽质量标准修订时，对性状进行补充和完善，这将对推进秦艽药材质量标准的应用具有重要意义。

〔1〕国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部〔M〕.北京：中国医药科技出版社，2015：270-271.

〔2〕曾育麟.云南的秦艽〔J〕.中药通报，1959，5（2）：66.

〔3〕段宝忠，黄林芳，尚飞能，等.云南野生抚育粗茎秦艽药材的品质评价〔J〕.中国实验方剂学杂志，2013，19（21）：82-86.

〔4〕吴靳荣，赵志礼，王妍妍，等.云南丽江产粗茎秦艽栽培品种的品质评价〔J〕.中成药，2010，32（2）：250-252.

〔5〕曹晓燕，王喆之.云南粗茎秦艽不同采收期4种环烯醚萜苷类成分的测定〔J〕.药物分析杂志，2010，30（4）：623-625.

〔6〕张晓灿，李杨，罗丹丹，等.基于指纹图谱和化学计量学的多基原秦艽药材化学品质比较研究〔J〕.大理大学学报，2017，2（6）：37-40.

〔7〕张晓灿，段宝忠，罗丹丹，等.不同海拔粗茎秦艽环烯醚萜苷类成分含量研究〔J〕.大理大学学报，2017，2（8）：13-17.

〔8〕曹晓燕.秦艽种质资源研究〔D〕.西安：陕西师范大学，2010.

〔9〕崔景荣，赵喜元，张建生，等.四种秦艽的抗炎和镇痛作用比较〔J〕.北京医科大学学报，1992，24（3）：225-227.

〔10〕聂燕琼，李海彦，孙娜，等.粗茎秦艽资源研究进展〔J〕.中国现代中药，2012，14（5）：37-40.

〔11〕杨月娥，刘亚玲，田新雁，等.五种云南黄芪属植物的生药学研究〔J〕.时珍国医国药，2014，25（12）：2924-2927.