赵 楠，辛 华，张乐宁，聂海英

(吉林大学中日联谊医院 胸外科，吉林 长春130033)

肺癌血行转移是一个高度选择性的非随机生物学过程，包括肺癌细胞与血管内皮细胞及细胞外基质之间一系列复杂的生物学作用。其中肺癌细胞向血管外游走是肺癌血行转移的重要步骤。为此，我们在体外模拟构建了肺癌细胞血行转移中的血管外游走过程，并对肺癌细胞的血管外游走状况加以探讨。

1 材料与方法

1.1 实验所用细胞

在包被有明胶的细胞培养皿上培养人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cell，HUVEC)；4种肺癌细胞分别为：VMRC-LCD、LK-2、A549、RERF-LC-KJ。

1.2 血管内皮单细胞层的制备

将3×104个HUVEC加入预先制备胶原凝胶层的细胞培养皿内[1]，培养1周，将细胞培养皿放入装有正负电极的培养容器内，与电阻测定仪相连，记录血管内皮单细胞层的电阻值。

1.3 肺癌细胞血管外游走实验

制成血管内皮单细胞层后，分别将1×105个肺癌细胞(VMRC-LCD、LK-2、A549、RERF-LC-KJ)加入细胞培养皿内；分别在血管内皮单细胞层上加入肺癌细胞1 h、3 h、6 h、12 h后除去细胞培养液，将胶原凝胶层及其表面的细胞完整取出，石蜡包埋，制成组织切片，苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining)后在光镜(100×)下分别观察各种肺癌细胞与HUVEC粘附及游走至胶原凝胶中的状态，同时记录单位长度(5 mm)中穿过HUVEC游走至胶原凝胶中的肺癌细胞数量。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 血管内皮单细胞层的确认

血管内皮单细胞层的电阻值为9.68±2.05 ohm/cm2，与相关研究报道的数值基本一致[2]，可以认为HUVEC已完全融合生长，在胶原凝胶表面制备成血管内皮单细胞层。

2.2 各……

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