刘建奎，魏春华，黄春芳，陈小燕，戴爱玲，杨小燕

龙岩学院生命科学学院 福建省家畜传染病防治与生物技术重点实验室 福建省生猪疫病防控工程技术研究中心，福建龙岩 364000

猪繁殖与呼吸综合征 (Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS) 是由猪繁殖与呼吸综合征病毒 (Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV) 引起的一种全球性的猪病毒性传染病[1-3]。PRRS于1996年在我国大陆首次暴发，随后该病迅速蔓延暴发，成为我国规模化养猪场主要疫病之一。2006年，在我国南方地区暴发的高致病性PRRSV (Highly Pathogenic PRRS Virus，HP-PRRSV)，给我国的养猪业造成了严重的经济损失[4-5]。2013年国内出现了新流行毒株，该毒株与2008年美国分离到的NADC30毒株亲缘关系较近，称之为NADC30-like PRRSV，随后迅速蔓延至全国多个省市，给猪场防控PRRS带来了严峻挑战[6-8]。由于PRRSV存在多种基因型，不同基因型的毒株在抗原性方面有很大的差异，导致现有的疫苗尚不能完全有效地防控所有或大部分PRRSV流行毒株。GP5蛋白为ORF5编码的一种高度糖基化的蛋白，是PRRSV基因组中变异最大的结构蛋白。GP5是PRRSV最主要的保护性抗原，含有与病毒中和作用和免疫保护相关的表位，能诱导机体产生中和抗体[9-10]。此外，PRRSV侵入机体后，主要产生的是针对GP5蛋白的中和抗体，因此GP5蛋白成为研制新型疫苗的首选蛋白[11-12]。

DNA shuffling技术是由Stemmer[13]于1994年首先提出的，是一项全新的体外人工进化模式，通过基因在分子水平上的重组，再以定向筛选具有预期形状的突变体，获得同时具有多个亲本基因特征的突变基因。如今DNA shuffling技术在生物工程的领域得到了广泛的应用。在对病毒载体的改造方面，Maxygen公司利用DNA shuffling对4种相关但抗原不同的登革热毒株改造后，获得了突变抗原，其产生的抗体能与4种亲本毒株发生免疫反应[14]。……