高洁 严敏 付婷 邵中军

流感作为常见病, 有季节性流行的特点, 病原菌种类较多, 不同病毒有不同检测手段［1］。明确何种病毒所致, 对于进一步治疗有很大帮助, 乙型流感病毒作为仅在人之间传播的一种疾病, 与甲型流感病毒患病表现十分相似［2-4］。根据乙型流感病毒的核酸特点, 进行TapMan荧光定量RT-PCR快速检测现采用较多, 为了探究其效果, 选取不同病毒和送检样本进行实验, 现将结果整理如下。

1 材料与方法

1.1 材料 选择2017年1～4月送至本实验室检验的确诊感染乙型流感病毒的咽拭子24例(均经血清学检测, 确诊为乙型流感病毒), 由北京生物制品研究所提供的甲型流感病毒(H1和H3)、呼吸道合胞病毒、禽流感病毒以及乙型流感病毒,以及用于效价滴定的MDCK细胞。

1.2 试剂 由北京奥科生物技术有限责任公司提供, 引物为乙型流感病毒核酸基因NP的一段保守序列, 只含有一级结构, 碱基数量在20个以内, 各引物不互补；探针5’端识别 FAM, 3’端识别 TAMRA［5］。

1.3 方法 ①选择MDCK细胞将乙型流感病毒进行效价滴定, 分别制成不同浓度的制剂(10.00、1.00、0.10、0.01 TCID50/管), 待实验使用。②选择RT-PCR试剂盒(由NEB公司生产), 进行逆转录和扩增, 35次循环后取产物, 观察特异性条带的存在情况。③提取甲型流感病毒(H1和H3)、呼吸道合胞病毒、禽流感病毒以及乙型流感病毒的核酸, 进行TapMan荧光定量RT-PCR检测。④对不同浓度的乙型流感病毒制剂分别进行常规RT-PCR和TapMan荧光定量RTPCR检测。⑤采用常规RT-PCR和TapMan荧光定量RTPCR检测送检的咽拭子样本, 并与血清学检查结果对比。

1.4 观察指标 ①记录TapMan荧光定量PT-PCR对于不同病毒检测的特异性。……