李湘力,胡 涛,刘小宁,蔡敬宙,柯 姗

(1.广州市第一人民医院，广东 广州 510180;2.武汉市儿童福利院，湖北 武汉 430060)

肠易激综合征(Irritable bowel syndrome，IBS)是以腹痛或腹部不适，大便习惯改变，并伴有一系列胃肠道症状及精神症状而肠道缺乏明显病理性改变为特征的功能紊乱性疾病，其中以腹泻型肠易激综合征(Irritable bowel syndrome with diarrhea,IBS-D)多见[1]。最近国内外一系列重要临床研究结果认为针灸对治疗和缓解IBS-D症状有着明显的成效[2-4]，然而其更加深入的分子生物学机制研究还十分有限。

本研究利用Wistar大鼠建立IBS-D模型，并针刺穴位，观察针刺对IBS-D的缓解作用以及体内Nrf2-Keap1-ARE通路表达情况，并利用siRNA技术，沉默大鼠体内Nrf2基因，探讨此通路在IBS-D的保护作用。

1 材料与方法

1.1 动物及分组

4周龄Wistar大鼠50只，雄性，体质量100～120 g，由广州医科大学动物实验中心提供,所有动物均依据动物实验伦理委员会的要求进行实验。在适应性喂养1周后，50只Wistar大鼠随机分为IBS-D模型组、药物致泻模型+强行应激法(Chronic and acute stress,CAS)刺激组、CAS+针刺组、CAS+针刺+Nrf2 siRNA(Nrf2sh)组和正常组，每组10只。

1.2 主要仪器与试剂

Bio-Rad CFX96 System PCR仪(美国伯乐公司)；0.30 mm×15 mm华佗牌一次性无菌针灸毫针(苏州医疗用品厂有限公司);RNAiso Plus试剂盒(日本Takara公司)；5-HT、NPY试剂盒(北京百奥莱博科技有限公司)；MDA、GSH/GSSG试剂盒(南京建成生物工程研究所)；SOD试剂盒(日本同仁化学公司)；ROS试剂盒(上海碧云天生物技术研究所)；Real-time PCR 相关试剂盒(上海基尔顿生物科技有限公司)；相关Western-blot一抗及二抗(美国Abcom or Cell signaling公司)。

1.3 造模方法

大鼠通宵光照12 h→45℃环境温度刺激5 min→饮水剥夺24 h→4℃低温环境3 min→鼠尾夹刺激1 min→水平振动(120/min)刺激40 min→食物剥夺24 h，持续3周[5]，获得IBS-D模型大鼠。……