戴健兴 宋伟清 利文亮 郑海源 冯燕飞

能力验证：即利用实验室间比对，按照预先制定的准则评价参加者的能力。测量审核：实验室对被测物品（材料或制品）进行实际测试，将测试结果与参考值进行比较的活动。通过能力验证和测量审核能够评定实验室从事特定检测或测量的能力，识别实验室存在的问题并启动改进措施，提高实验室的检测能力等。因此，参加能力验证活动对实验室质量控制有着非常重要的意义。江门市量子高科（中国）生物股份有限公司分析检测中心从2015年首次参加中国检验检疫科学研究院测试评价中心测量审核项目，2016年开始参加该组织的检测能力验证计划。在这三年中发现了检测过程中存在不少问题，现将从中总结的经验与同行分享，请同行多多指教。

材料

样品来源：中国检验检疫科学研究院测试评价中心提供的测量审核和检测能力验证计划样品，样品为白色冻干粉末。样品标示分别为：测量审核项目ACAS- 15- （MA- A854，MA15- A158，MA15- A469）；检测能力验证计划：ACAS- PT201（2016）16- F444、16- G790和ACAS- PT336

（2017）17- G889、17- H202。

仪器

霉菌培养箱MJ - 250BSH- III：28℃±1℃、生化培养箱SPX- 250BS-Ⅱ：28℃±1℃、电子天平J J 2000：感量0.1g、数显恒温水浴锅HH-8：46℃±1℃、生物显微镜 XSP- 2CA：10×～100×。

试剂

孟加拉红培养基（虎红琼脂），生产商：广东环凯微生物科技有限公司

检测方法

GB4789.15- 2010《食品微生物学检验 霉菌和酵母计数》、GB 4789.15- 2016《食品微生物学检验 霉菌和酵母计数》、相关的测量审核作业指导书和参试指导书。

操作步骤

（1）按照测量审核作业指导书和参试指导书的要求进行样品水化。从冰箱取出待测样品应使其达到室温方可开启使用。首先无菌开启西林瓶，立即加入4 mL生理鹽水进行再水化，待溶解后，吸出放入无菌瓶中，再反复用余下的稀释液清洗西林瓶内壁，回收清洗液放入上述无菌瓶中，合计40 mL。此溶液即是待测样品原液。

（2）在净化工作台上以无菌操作取样品25.0mL于225mL灭菌生理盐水中，均质后充分振摇做成1：10的均匀稀释液。用1mL灭菌吸管吸取上述稀释液1mL，加入9mL灭菌生理盐水中，混合均匀，做成1：100的稀释液，按上述方法操作，做10倍递增稀释，制备稀释梯度为10- 1、10- 2、10- 3、10- 4，以此类推。选择适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度吸取1mL于灭菌培养皿内，倾注温度为46℃左右的孟加拉红培养基20mL～25mL，转动平皿使其混合均匀。置水平台面待培养基完全凝固。待琼脂凝固后，正置平板，置于28.0℃培养箱中培养5d后进行菌落计数。同时做空白对照。

结果

检测结果及评价：（表1）实验室参加三次测量审核和两次检测能力验证计划，一共检测7个样品，其中酵母一个，霉菌两个，霉菌和酵母4个。结果7个中5个获得满意结果，1个可疑，1个不满意。

分析

酵母：在2015年参加的测量审核中，检测的酵母获得了满意结果。在2016、2017年检测的酵母结果均与其他的实验室的结果差别不大。主要原因是因为酵母在孟加拉红培养基上生长的菌落清晰，容易分辨，不会出现菌落蔓延生长，在计数时检验员能准确的对酵母计数。从而得出满意的结果。

霉菌：15年第一次检测霉菌MA15- A158样品时，由于霉菌的生长产生孢子和菌丝，导致在培养第5天时，原液稀释度的平板上霉菌出现了片状菌落，无法分清霉菌的数量，因而取了稀释梯度为10- 1的数值。最后导致检测结果偏差，结果为不满意。在第二次检测测量审核样品时，在培养的过程中每天观察，当平板上生长出菌落时，每天定时计算平板上的菌落和生长的位置，在培养结束时根据之前的观察菌落生长的位置对平板上的菌落进行计数。在2016年的能力验证项目中16- F444样品稀释度10- 2平板上生长较多霉菌，有霉菌重叠交错生长。稀释度10- 1为78，其中酵母50，霉菌28；稀释度10- 2为10，酵母为6，霉菌为4。两个稀释度都在国标的菌落计数范围内。在这种情况下应当须稀释度高的结果。第一可以避免检测人员在稀释度低对霉菌计数时出现偏差对结果造成影响。第二，当两个稀释度都满足计数的情况下，取较大的数值在数学统计上更靠近稳健均值，使结果在Z值更接近满意范围。

讨论

2016年ACAS- PT201乳粉中霉菌和酵母的检测能力验证中期报告，共有100家实验室参加了检测能力验证计划，其中有72家检测了Ⅰ组样品，本实验室16- F444样品为Ⅰ组样品，其中62家结果满意，5家结果可疑，5家结果不满意，满意率为86.1%。16- G790样品为Ⅱ组样品，共有100家检测，其中95家结果满意，2家结果可疑，3家结果不满意，合格率为95%。2017年ACAS- PT336食品中霉菌和酵母计数能力验证计划中期报告，仅提供了获得满意的实验室信息，共有77家获得满意结果。通过对第一年和第二年的检测，发现了实验室检测人员对标准的理解有存在误区。经过对这两年的检测的结果进行了分析，寻找原因，并在第三年的检测时注意避免同问题的发生，使得17年的结果都获得了满意的结果，并且Z值都很低，接近稳定均值。现对这三年检测霉菌和酵母的结果和检测中发现和存在的问题做个总结。