王卫东，高 翔,2，何庆梦，姚晓露，刘 阳，杨明明,2，李建芳,2，杨 娜

(1.西北农林科技大学农学院，陕西杨陵 712100；2.陕西省小麦工程技术研究中心，陕西杨凌 712100；3.山西省农业科学院棉花研究所，山西运城 044000)

小麦(TriticumaestivumL.)贮藏蛋白主要包括醇溶蛋白和谷蛋白两大类，依据分子量大小可将谷蛋白进一步分为高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS)和低分子量谷蛋白亚基(LMW-GS)[1]。其中，HMW-GS与面筋弹性和延展性密切相关，是参与形成谷蛋白多聚体的主要成分[2]；HWM-GS的组合不同则产生的品质效应不同[3]。对小麦品种中HMW-GS的分离鉴定已成为品质研究的重要环节。

传统方法分离小麦HMW-GS多采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)和高效液相色谱(HPLC)等[4-7]。SDS-PAGE分离所需时间较长，对样品需求量较大，分离效果容易受环境及人为因素影响，且在鉴定亚基类型时需要对照“Payne命名系统”，准确性低，一些迁移率接近的亚基难以被区分。虽然结合分子标记技术可以在一定程度上弥补这一缺点，但由于特异性引物种类有限、实验前需要对种子发苗、提取和纯化样品DNA等，工作效率较低。HPLC较 SDS-PAGE方法克服了很多不足，但其成本较高，适用范围窄。HPCE(毛细管电泳)技术以其进样少、运行成本低、快速、准确性高等特点，被越来越多地应用于小麦HMW-GS研究[8-11]。

HPCE中，分离介质缓冲液的选择至关重要。目前，应用于小麦贮藏蛋白分离的常规HPCE缓冲系统主要包括磷酸盐缓冲液系统、硼酸盐缓冲液系统、乳酸铝缓冲液系统及Prosot SDS。Bietz[12]最早将酸性磷酸盐缓冲液与碱性硼酸盐缓冲液引入到HWM-GS的HPCE中，并获得了较好的分离效果。Werner等[13]首次使用乳酸铝缓冲液分离小麦HMW-GS，并成功鉴定了多个品种的亚基组成，之后又以Prosort SDS为缓冲剂对HMW-GS相关特性进行了研究[14]。Sutton等[15]在Prosot SDS中加入5%甲醇，对HMW-GS的HPCE鉴定图谱进行了研究。Bean等[16]使用Phos-gly(磷酸-甘氨酸)缓冲液对HMW-GS进行HPCE电泳分离，相比前人获得了更好的分辨率及分离效果。

上述应用于小麦HMW-GS分离的HPCE缓冲液系统，虽然具有较好的分离效率，但重现性较差，对亚基的定性分析尚显不足，不利于亚基标准鉴定图谱的构建。本试验以普通小麦中国春为标准样，引入亚氨基二乙酸(IDA)缓冲液系统[17]，拟通过研究毛细管电泳中不同缓冲液组分浓度、缓冲液pH、分离电压、进样时间、运行温度、毛细管内径等对亚基分离的影响，确立小麦HMW-GS的HPCE高效分离体系，并通过连续重复试验、混合进样分析对体系的分离效率及重现性进行验证，以期为HPCE定性分析及标准鉴定图谱的构建提供基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

小麦品种中国春、石4185、陕182，由国家小麦改良中心杨凌分中心品质实验室提供。

1.2 方法

1.2.1 小麦HMW-GS的提取

参照文献[7]的方法并作改进：将单粒种子研磨成粉后加1 mL 70%乙醇振荡30 min，20 ℃ 13 000 r·min-1离心10 min，弃上清液；向沉淀中加入1 mL提取液A(50%异丙醇)，混匀，60 ℃水浴30 min；室温下13 000 r·min-1离心10 min，弃上清，重复此步骤2次。向沉淀中加入150 μL提取液B[50%异丙醇+3 mol·L-1Tris-HCl(pH=8.8)+25 g·L-1二硫苏糖醇]，混匀后60 ℃水浴30 min。加入150 μL提取液C[50%异丙醇+3 mol·L-1Tris-HCl(pH=8.8)+10 g·L-14-乙烯基吡啶]，65 ℃继续水浴1 h。将水浴后产物于20 ℃ 13 000 r·min-1离心15 min，取120 μL上清液，加入80 μL预冷(-20 ℃)的丙酮溶液，使丙酮占总体积的40%。将混合液于-20 ℃冰箱中沉淀过夜，20 ℃ 13 000 r·min-1离心10 min，弃上清液，所得沉淀即为HMW-GS。

1.2.2 毛细管电泳系统运行前后处理

将1.2.1所得的蛋白沉淀烘干，加入200 μL蛋白溶解液(每50 mL含：15 mL丙三醇+18 g尿素+75 μL乙酸)，于35 ℃水浴溶解1 h，-20 ℃保存备用，使用前超声脱气。与毛细管电泳相关的缓冲液及冲洗试剂均由超纯水配置，经0.45 μm滤膜过滤，20 ℃、50 W超声脱气15 min。

电泳分离前的冲洗程序为：N2反向吹干1 min，1 mol·L-1H3PO4冲洗2 min，0.1 mol·L-1NaOH冲洗2 min，去离子水冲洗1 min，缓冲液冲洗3 min。实验结束后用0.1 mol·L-1NaOH冲洗2 min，反向去离子水冲洗1 min。

1.2.3 毛细管电泳分离体系的优化

使用P/ACE MDQ plus毛细管电泳仪(Beckman，USA)对样品进行分析。毛细管配置为检测长度27 cm的石英非涂层毛细管(USA)。IDA缓冲液组分为：IDA(亚氨基二乙酸)+HPMC(羟丙基甲基纤维素)+ACN(乙腈)。利用控制变量法，对缓冲液系统及电泳分离参数进行逐一优化，确立HMW-GS毛细管分离最佳体系。缓冲液系统pH设置为2.2、2.5、2.8；缓冲液组分中IDA浓度设置为50、75、100 mmol·L-1；HPMC浓度设置为0、0.05%、0.5%；ACN浓度设置为10%、15%、20%。电泳参数中，分离电压设置为15、20、25 kV；运行温度设置为25、30、35 ℃；毛细管内径设置为25、50 μm；进样时间设置为5、8 s。

1.2.4 HMW-GS毛细管电泳分离体系重现性验证

利用构建好的HPCE高效分离体系，对小麦品种中国春的HMW-GS进行连续30次及连续多天电泳分离，检验毛细管电泳图峰形、基线稳定性。将中国春与石4185、陕182混合进样，比较该体系与常规Phos-gly/ACN体系(磷酸-甘氨酸+HPMC+ACN)的分离效率及图谱分辨率，计算各亚基出峰时间的RSD值，验证分离重现性。

2 结果与分析

2.1 缓冲液系统pH的选择

依据Salmanowicz等[18]、Yan等[19]的研究，毛细管电泳分离图谱中，中国春的HMW-GS具有四个特征峰，按迁移时间顺序分别为1Dy12→1By8→1Bx7→1Dx2。由图1可知，在缓冲液为100 mmol·L-1IDA+0.05% HPMC+20% ACN，采用25 μm内径毛细管，214 nm检测波长，分离电压15 kV，运行温度25 ℃，10.0 kV电进样5 s条件下，缓冲液pH对HMW-GS峰高、峰宽及基线均有显著影响。pH为2.8时，8.13 min出现1Dy12亚基主峰；1By8主峰出峰时间为9.97 min，峰高较低，主峰辨别度差，且峰后有基线的波动；1Bx7主峰出峰时间为11.54 min；1Dx2主峰出现在13.12 min；从1Dy12到1Dx2亚基峰时间跨度为4.99 min；整体上看基线有明显的上升趋势。pH为2.5时，四个主峰出峰时间分别为10.24、11.94、13.40和15.00 min；相比pH2.8时出峰时间较晚，时间跨度稍有减小(4.76 min)，但整体峰形对称、分离度较高、基线相对平稳。pH为2.2时，四个主峰出峰时间为11.57、12.55、14.31和16.08 min，时间跨度为4.51 min；相比pH为2.5、2.8，峰宽度增大、分离度降低；而且在临近1Dy12亚基主峰时基线波动较大，1By8主峰与1Bx7主峰之间也出现了类似现象。说明pH为2.5时亚基分离效果较好。

A、B、C曲线所对应的pH分别为2.8、2.5、2.2。

The corresponding pH of A,B and C curves are 2.8,2.5 and 2.2,respectively.

图1不同pH缓冲液对HMW-GS电泳分离的影响

Fig.1EffectofdifferentpHofbufferonelectrophoresisseparationofHMW-GS

2.2 缓冲液系统组分浓度的选择

2.2.1 IDA浓度的选择

如图2所示，缓冲液为：0.05% HPMC+20% ACN，pH 2.5。电泳条件为：毛细管内径25 μm，检测波长214 nm，分离电压15 kV，运行温度25 ℃，10.0 kV进样5 s，中国春的HMW-GS亚基整体迁移速率随IDA浓度的增大而加快，浓度对亚基峰高、峰形及基线状况影响不大。比较相同IDA浓度下连续两针的电泳图谱发现，IDA浓度对电泳分离重现性的影响较大。IDA浓度为50 mmol·L-1时，亚基迁移速率最慢，电泳第一针与第二针之间的出峰时间差异最大。IDA浓度为100 mmol·L-1时，亚基迁移最快，连续两针间电泳出峰时间差值减小，但仍然较大，且在1Dy12主峰之前出现了基线的波动。IDA浓度为75 mmol·L-1时，亚基迁移速率介于50和100 mmol·L-1之间，两针间电泳出峰时间几乎重合，亚基峰形、基线均保持较高的一致性，电泳分离重现性较高。说明IDA浓度为75 mmol·L-1的亚基分离效果较好。

A和B、C和D、E和F曲线分别表示IDA浓度为100、75、50 mmol·L-1时电泳第一针、第二针。

A and B,C and D,and E and F represent the first and second electrophoresis when the concentration of IDA was 100 mmol·L-1,75 mmol·L-1and 50 mmol·L-1,respectively.

图2不同IDA浓度对HMW-GS电泳分离的影响

Fig.2EffectofdifferentconcentrationofIDAontheelectrophoresisseparationofHMW-GS

2.2.2 HPMC浓度的选择

如图3所示，缓冲液为75 mmol·L-1IDA+20% ACN，pH 2.5。电泳条件为：毛细管内径25 μm，检测波长214 nm，分离电压15 kV，运行温度25 ℃，10.0 kV进样5 s。HPMC浓度对HMW-GS分离度及基线状况有显著影响。不添加HPMC时，亚基迁移速度最快，但峰之间未完全分离，主峰界线不明显，且峰形不规则。HPMC浓度为0.5%时，峰宽明显变窄，亚基分离度最高，但基线噪音较大，影响了图谱的分辨率。HPMC浓度为0.05%时，1Dy12、1By8、1Bx7、1Dx2四个主峰出峰时间分别为12.40、14.07、15.54和17.16 min，亚基分离度介于0与0.5%浓度之间，虽然亚基迁移速率降低，但主峰峰形对称，且基线噪音很小，图谱分辨率高。说明HPMC浓度为0.05%时最佳。

2.2.3 ACN浓度的选择

缓冲液为75 mmol·L-1IDA+0.05 % HPMC，pH 2.5，毛细管内径25 μm，检测波长214 nm，分离电压15 kV，运行温度25 ℃，10.0 kV进样5 s。添加不同浓度ACN，对HMW-GS毛细管电泳分离的影响主要集中在主峰分离度上(图4)。ACN浓度为20%时，四个主峰分离度最低。ACN浓度为10%时，主峰分离度最大，但是峰宽增大、峰高明显降低，即亚基纵向扩散与峰展宽比例减小，影响图谱的分辨率。当ACN浓度为15%时，主峰分离度介于前两者之间，1Dy12、1By8、1Bx7、1Dx2主峰依次出现在12.68、14.32、16.80和18.94 min，亚基峰形清晰对称，基线噪音最低。因此，ACN浓度为15%最佳。

A、B、C曲线分别对应HPMC浓度0.5%、0.05%、0。

A,B and C curves correspond to 0.5%,0.05% and 0 of HPMC,respectively.

图3不同HPMC浓度对HMW-GS电泳分离的影响

Fig.3EffectofdifferentconcentrationofHPMConthe

electrophoresisseparationofHMW-GS

A:20% ACN; B:15% CAN; C:10% ACN.图4 不同ACN浓度对HMW-GS电泳分离的影响Fig.4 Effect of different concentration of ACN on theelectrophoresis separation of HMW-GS

2.3 毛细管电泳分离条件的选择

2.3.1 毛细管分离电压的选择

利用已经优化好的IDA缓冲液系统，对毛细管电泳运行参数进行逐步优化，进一步提高HMW-GS分离效果。

缓冲液为75 mmol·L-1IDA+0.05% HPMC+15% ACN，pH为2.5；毛细管内径25 μm，检测波长214 nm，运行温度25 ℃，10.0 kV进样5 s。如图5所示，当分离电压为15 kV时，基线水平、亚基分离度较高，但是峰高相对较低，且迁移速度最慢。当电压增大为20 kV时，主峰分离度未受明显影响，与15 kV差异不大，亚基峰高明显增大、整体迁移速率明显加快，图谱分辨率得到了提升。电压达到25 kV时，虽然获得了最大迁移速率及峰高，但是基线出现了整体下降的趋势。由此可见，分离电压的提高对迁移速率及峰高有促进作用，但会增加分离不稳定因素。综合来看，20 kV分离电压对HMW-GS的分离效果最佳。

A:15 kV; B:20 kV; C:25 kV.图5 分离电压对HMW-GS电泳分离的影响Fig.5 Effect of separation voltage on the electrophoresisseparation of HMW-GS

2.3.2 分离温度的选择

缓冲液为75 mmol·L-1IDA+0.05% HPMC+15% ACN，pH 2.5；毛细管内径25 μm，检测波长214 nm，分离电压20 kV，10.0 kV进样5 s。当分离温度为25 ℃时，图形清晰，亚基峰形对称，四个主峰出峰时间依次为10.93、12.81、15.98和18.13 min(图6)。温度为30 ℃时，亚基分离度与25 ℃时接近，但亚基出峰更早；四大主峰分别出现在9.31、11.69、13.18和14.77 min，时间跨度为52.4 min，整体迁移速度更快；亚基纵向扩散与峰展宽比例扩大，从而带来主峰辨识度的提高。温度为35 ℃时亚基分离度达到最大，出峰时间分别为8.22、10.38、13.14和15.56 min，但是亚基峰高明显变小，基线波动较大，噪音增强，导致图谱分辨率明显下降。由此可见，分离温度为30 ℃时分离效果最好。

2.3.3 PDA检测波长的选择

缓冲液为75 mmol·L-1IDA+0.05% HPMC+15% ACN，pH 2.5；毛细管内径25 μm，分离电压20 kV，运行温度30 ℃，10.0 kV进样5 s。结果(图7)表明，PDA检测波长与分离图谱中亚基峰宽和基线噪音密切相关，对峰高有轻微影响，对图谱亚基出峰时间的影响不大。PDA波长由214 nm转变为200 nm时，基线噪音更小，亚基峰宽减小，峰高略微增大，这使得亚基纵向扩散与峰展宽比例进一步增大，带来了主峰辨识度的提高。因此PDA检测波长为200 nm时最佳。

A、B、C曲线分别对应25、30和35 ℃。

A,B and C curves are 25,30 and 35 ℃,respectively.

图6毛细管内运行温度对HMW-GS电泳分离的影响

Fig.6Effectofthecapillarytemperatureonthe

electrophoresisseparationofHMW-GS

A:214 nm; B:200 nm.图7 PDA检测波长对HMW-GS电泳分离图谱的影响Fig.7 Effect of PDA wavelengths on theelectrophoresis separation of HMW-GS

2.3.4 进样时间的选择

缓冲液为75 mmol·L-1IDA+0.05% HPMC+15% ACN，pH 2.5；毛细管内径25 μm，检测波长200 nm，分离电压20 kV，运行温度30℃，10.0 kV进样。当进样时间为5 s时，峰形清晰，亚基分离度高，基线平稳。进样时间为8 s时，电泳迁移速率与进样5 s差异不大，但峰宽明显增大，1Bx7、1Dx2主峰峰高显著降低，四个主峰之间界线模糊，亚基分离度较差，图谱分辨率降低(图8)。因此，进样时间为5 s时分离效果好。

A:8 s; B:5 s.图8 不同进样时间对HMW-GS电泳分离图谱的影响Fig.8 Effect of different sampling time on theelectrophoresis separation of HMW-GS

2.3.5 毛细管内径的选择

缓冲液为75 mmol·L-1IDA+0.05% HPMC+15% ACN，pH 2.5；检测波长200 nm，分离电压20 kV，运行温度30 ℃，10.0 kV进样5 s。结果(图9)表明，毛细管内径同时影响亚基峰宽、分离度及基线稳定性。毛细管内径为25 μm时，亚基分离度高，亚基峰形对称，基线水平，背景噪音低。当毛细管内径为50 μm时，亚基分离度降低，峰宽增大，峰高降低；电泳迁移率降低，亚基出峰较晚，1Dy12、1By8、1Bx7、1Dx2四个主峰依次出现在第10.81、12.24、13.78和15.58 min处；1Dy12主峰出峰之前有明显的基线波动，电泳分离后期基线逐渐上升，且有倒峰及杂峰出现。由此可见，毛细管内径为25 μm时最佳。

2.4 HMW-GS毛细管电泳高效分离体系及验证

在优化后条件下，即缓冲液组分为15% ACN+75 mmol·L-1IDA+0.05% HPMC，pH为2.5；毛细管内径25 μm， PDA检测波长200 nm，分离电压20 kV，运行温度30 ℃，样品10.0 kV电进样5 s，对中国春的HMW-GS连续多次电泳分离。结果(图10)发现，第1～2 min为系统峰(溶剂峰)，3～6 min为微量LMW-GS区域，HMW-GS在9 min后开始出峰，1Dy12、1By8、1Bx7、1Dx2亚基16 min内全部分离完成。连续30次、连续6 d重复试验(图10、11)，均显示图谱亚基峰形一致、分离度高、基线水平。通过混合进样方式，与常规的Phos-gly/ACN体系进行对比。

A:25 μm; B:50 μm.图9 不同毛细管内径对HMW-GS电泳分离图谱的影响Fig.9 Effect of different inner diameters of the capillaryon the electrophoresis separation of HMW-GS

图中所示曲线从下往上依次为第1、5、10、15、20、25、30次电泳分离曲线。

The curves from bottom to top are first,fifth,tenth,fifteenth,twentieth,twenty-fifth and thirtieth electrophoresis separation curves,respectively.

图10中国春HMW-GS连续30次毛细管电泳分离图谱

Fig.10Imageofthirtyconsecutiveinjections

ofHMW-GSofChineseSpring

图中所示曲线从下往上依次为第1、2、3、4、5、6天电泳分离曲线。

The curves from bottom to top are the curves of the first day,the second day,the third day,the fourth day,the fifth day and the sixth day,respectively.

图11中国春HMW-GS连续6d电泳图谱

Fig.11ContinuousrepeatedexperimentofHMW-GSofChineseSpringforsixdays

结果(图12、表1)表明，该体系在亚基分离速度、图谱分辨率上更具有优势，对于迁移率比较接近的亚基(如1Dy12与1Dy10、1By9与1By8、1Dx5与1Dx2)更容易表征；亚基出峰时间RSD(<0.2%)值远小于后者，说明分离重现性更高。

A、B均为中国春(Null，7+8，2+12)与石4185(1，7+9，2+12)、陕182(1，7+8，5+10)混合样的分离图谱。图A电泳条件：25 μm毛细管，200 nm检测波长，缓冲液组分75 mmol·L-1IDA+0.05% HPMC+15% ACN，pH 2.5，分离电压20 kV，运行温度30 ℃，10.0 kV电进样5 s。图B电泳条件为：25 μm毛细管，214 nm检测波长，缓冲液组分100 mmol·L-1Phosphate-glycine+0.05% HPMC+20% ACN，pH 2.5，分离电压12.5 kV，运行温度40 ℃，10.0 kV电进样5 s。

A and B are both the separation curves obtained from the mixture of Chinese Spring(Null,7+8,2+12) ,Shi 4185(1,7+9,2+12) and Shaan 182(1,7+8,5+10).The electrophoresis conditions of Fig.A:Inner diameter of the capillary was 25 μm; Detection wavelength was 200 nm; Buffer composition was 75 mmol·L-1IDA + 0.05% HPMC + 15% ACN,with pH at 2.5; Separation voltage was 20 kV; Operating temperature was 30 ℃; Samples were injected for five seconds by electric method under under 10.0 kV.The electrophoresis conditions of Fig.B:Inner diameter of the capillary was 25 μm;Detection wavelength was 214 nm; Buffer composition was 100 mmol·L-1phosphate-glycine + 0.05% HPMC + 20% ACN,with pH at 2.5;Separation voltage was 12.5 kV;Operating temperature was 40 ℃;Samples were injected for five seconds by electric method under under 10.0 kV.

图12 不同分离体系效果比较

表中数据为连续30次电泳分离所得平均值。

The data is the average value obtained from 30 consecutive injections.

3 讨 论

小麦HMW-GS与小麦品质密切相关，其分离鉴定是品质研究的重要环节。与传统方法相比，HPCE具有快速、自动化、分辨率高等特点。依据电泳图谱可获得亚基的准确峰高、迁移时间等，有助于亚基定性及定量分析。本试验结果表明，HPCE分离体系中缓冲液pH、缓冲液组分、分离电压、运行温度、进样时间、检测波长及毛细管内径等条件的变化均会影响分离效果。

Bean等[20]最先将IDA/ACN缓冲系统应用到蛋白HPCE分析中，主要对醇溶蛋白的分离进行了探讨，本试验首次将其引入到HMW-GS的HPCE分析中，通过优化条件，同样获得了良好的分离效果。Righetti等[21]表明IDA/ACN缓冲液系统分离蛋白质的最佳pH为2.2～2.8。本研究发现，pH > 2.5会导致基线不稳定趋势增加。由于HMW-GS属于大分子蛋白[22]，容易吸附在毛细管壁上，使电渗流改变，影响电泳分离重复性，极端pH可以抑制蛋白吸附，维持电渗流稳定，但当pH达到一定范围时，该作用将显著减弱。推测pH>2.5时抑制作用降低，电泳后期HMW-GS吸附作用增强，从而产生了较多的焦耳热，导致了基线的上升。IDA在毛细管电泳中主要影响分离的重现性，本研究结果表明，其浓度为75 mmol·L-1时，分离体系重现性较好。HPMC是一种亲水高分子聚合物[23]，在缓冲液系统中具有充当筛分介质[24]和动态修饰的作用[25]，影响亚基分离度及基线状况。HPMC浓度增大可能提高毛细管电泳灵敏度，但相应的图谱噪音也会增强。适当降低浓度可增大亚基分离度。由于缓冲液中HPMC浓度的改变亦可影响其粘性，缓冲介质粘性是影响电渗流的主要因素之一[26]，因此控制HPMC浓度有助于稳定毛细管电泳电渗流。ACN在缓冲液系统中的作用是通过加快样品堆积，促进迁移速率[27]，其浓度的变化往往影响电泳灵敏度，本试验发现，当ACN浓度提高时图谱噪音也会相应增高，再次验证了这一观点。由于HPCE是以高压电场为驱动力，温度影响着管内溶液的粘性[28]，因此两者数值升高均会提高图谱迁移速率，但也为电泳系统带来不稳定因素。本试验中，PDA检测波长对分离效果的影响主要是在图谱分辨率上，由于不同物质的最大吸收波长不同[29]，改变PDA检测波长则会引起图谱信噪比的变化。电压进样时间往往会影响进样塞的长度，进样塞长度过大时容易使峰展宽大于纵向扩散[30]，与本试验结果一致。本试验还发现，增大毛细管内径，会使分离度降低、基线波动，这可能是因为毛细管作为分离通道，其内径对散热影响较大；减小其内径有利于电泳过程中热量的散出，减少焦耳热的产生；内径过大，容易在毛细管内部形成温度梯度(中心温度高)，破坏塞流，进而导致亚基纵向扩散小于区带展宽[31]，降低分离效率。

本研究通过分析HPCE中不同因素对HMW-GS分离效果的影响，结合连续重复实验及比对验证，成功构建了基于IDA缓冲液系统的HPCE高效分离体系，由于该体系下图谱亚基分离度高、重现性好，因此有利于HMW-GS的定性分析。结合SDS-PAGE及分子标记等，可对HPCE分离图谱中不同类型HMW-GS进行表征，确定标准迁移时间。依据标准迁移时间，即可完成小麦材料中相关HMW-GS的快速鉴别。同时，该指标亦可作为新型未知亚基的鉴定标准。

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