叶维霞 郭建红

（泸州市人民医院消化内科 四川 泸州 646000）

结肠癌是全球常见的消化道恶性肿瘤之一，尽管其临床治疗方案不断提高，但由于缺乏有效的靶向治疗，死亡率仍居高不下[1]。因此，寻找到结肠癌有效的治疗靶点仍是当前的一个研究课题。MicroRNA(miRNA)是为一组内源性的非编码小分子RNA，可在转录后水平上调控基因的表达[2]。近年来多项研究证实miR-197在多种肿瘤中表达异常，与肿瘤的发生发展密切相关[3]。由此，本研究初步检测了miR-197在结肠癌细胞及组织中的表达，为下一步探讨 miR-197在结肠癌中所发挥的生物学功能奠定基础。

1.材料和方法

1.1 主要材料

收集2016年8月至2017年3月我院肛肠科结肠癌手术标本14例，每例包括结肠癌组织及对应癌旁组织（均得到病理诊断证实）。结肠癌细胞株HCT116、SW480、SW620、Lovo购买于上海生命科学研究院细胞库。TRlZOl试剂购自Invitrogen公司，反转录试剂盒购自Vazyme公司，Taqman MicroRNA Assay购自ABI公司。

1.2 研究方法

1.2.1 结肠癌细胞的培养

在结肠癌细胞株HCT116、SW480、SW620、Lovo中加入含10%胎牛血清的1640培养基，至37℃、5% CO2培养箱内培养，每2～3d换液，用0.25胰酶消化传代。

1.2.2 RNA提取及质量检测

按说明书用Trizol法分别提取4组结肠癌细胞株、14例结肠癌及对应癌旁组织中的RNA。采用紫外分光光度仪测定总RNA的纯度和浓度。

1.2.3 荧光定量RT-PCR

取1ugRNA按逆转录说明书将其逆转录为cDNA。按Tapman MicroRNA Assay说明以miR-197和RNU6B作模板，miR-197和RNU6B荧光探针作引物扩增，反应条件为，预变性：95℃10min；变性：95℃ 10s，退火，60℃ 20s，延伸，72℃ 34s，扩增40个循环。采用2-ΔΔCt计算miR-197的相对表达量。所有实验均重复3次，计算平均值。

1.3 miR-197靶基因的初步研究

我们利用生物信息学预测网站TargetScan、Pictar、microRNA.org预测miR-197作用的靶基因，通过取三者交集，预测出miR-197得分较高的靶基因。……