胡 俊,汤 斌，李 松

(安徽工程大学 微生物发酵安徽省工程研究中心，安徽 芜湖 241000)

抗菌肽是一种常见的生物拮抗剂，主要表现为对一些G+细菌(特别是一些致病菌，如金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌等)具有一定的拮抗作用[1]，因而在环境保护、医疗卫生和食品加工等众多领域都有着较为重要的应用．利用微生物生产抗菌肽具有生产周期短，产物易分离纯化等优点[2]，是工业上抗菌肽的主要获得途径．

抗菌肽纯化方法主要包括膜分离、电泳分离、层析技术以及高效液相色谱分离等[3]．在利用高效液相色谱(HPLC)对发酵液中的抗菌肽组分进行分离时，需要先对发酵液进行预处理，以降低分离体系中的蛋白丰度、分离难度以及避免造成仪器损坏．从目前的研究现状来看，预处理方式主要包括盐析、色谱柱粗分离、分级沉淀和有机萃取等[4]．胡瑞萍[5]等采用盐酸沉淀和Sephadex G-50 凝胶柱分离对枯草芽孢杆菌BSD-2抗菌肽进行了粗提取；刘静[6]等在枯草芽孢杆菌抗菌肽分离纯化过程中，采用阴离子交换柱DEAE-Sepharose FF等方式对发酵粗提液进行预处理；刘颖[7]等在分离抗真菌肽的过程中，通过调节发酵液酸碱度以及利用丙酮分级沉淀等方法对目的蛋白进行了粗提．由于抗菌肽具有分子量小、结构简单、稳定性较高且在有机溶剂和水中都具有一定的溶解性等特点[8]，所以，利用合适的有机溶剂对发酵液中的抗菌肽进行萃取可使其中大多数杂蛋白变性沉淀，而分子量较小的多肽……