马文良

随着转基因技术的快速发展，转基因作物的种植面积也在不断增加，转基因作物带来了巨大的社会效益、经济效益以及生态效益，然而转基因作物的安全性问题也引起了世界上许多国家和组织的广泛关注。转基因作物与自然选择导致的进化不同，自然选择是一种十分缓慢的进化，转基因作物由于基因受到了人为的修改，使这些作物能够迅速改变，因此这些作物的安全性很难判断。为了维护人们的知情权和选择权，已有超过40个国家相继颁布了转基因相关产品的标识制度。

转基因作物的检测技术

转基因作物不仅种类众多、数量庞大，而且深度处理会造成转基因成分的部分或完全降解，极大地增加了检测难度。为了更好地落实标识管理制度，还需要依靠科学技术的进步不断开发新的检测方法。目前针对转基因作物的检测技术主要分为两类：一类为蛋白质水平上的检测技术，例如免疫印迹法、酶联免疫吸附法、免疫试纸条法和蛋白质芯片法等；另一类为基于核酸水平上的检测方法，常见的有核酸分子杂交法、聚合酶链式反应法、基因芯片法以及等温扩增法。

蛋白质水平的检测技术

转基因作物所转入的外源基因通过表达会产生外源蛋白，通过抗原抗体的免疫反应对外源蛋白进行分析即可实现对转基因玉米的检测。

酶联免疫吸附法（ELISA）

ELISA是蛋白质检测中应用最广的技术之一，但是使用ELISA检测转基因作物不仅需要良好的抗体，而且还需要稳定的标准品来制作标准曲线，所以商业化的转基因ELISA检测产品并不多。ROMER LABS？作为世界知名的转基因检测产品生产商及第三方实验室之一，其产品的抗体有着高灵敏、高特异性的特点，且在试剂盒中包含了稳定的标准品，确保了检测结果的准确性。

ROMER LABS？试剂盒的原理是以抗原-抗体的特异性免疫反应为基础，同时结合酶的高效催化反应的一种高灵敏度蛋白检测方法。目标蛋白与固相载体上的抗体会形成抗原抗体复合物，再结合酶标的抗体或抗抗体，就能够利用酶的标记作用实现目标蛋白的检测。在反应中加入酶的底物后，底物经过酶的催化作用产生有色物质，根据显色的深浅便可进行定性或定量分析。这种方法通过酶催化作用，将抗原抗体反应的结果放大，极大地提高了检测方法的灵敏度。

免疫试纸条法（Lateral Flow Strip）

免疫试纸条法是基于免疫层析技术开发出的一种蛋白检测方法，其原理是将一对特异性抗体交联在试纸条上，当试纸条一端放入有抗原的溶液后，在毛细作用下，溶液会向着试纸条的另一端运动，溶液中的抗原在运动过程中会与标记的抗体结合并随层析液继续向另一端运动，当遇到在膜上固定的另一抗体时，就会形成标记“抗体-抗原-抗体”的“三明治结构”，形成肉眼可见的条带。

ROMER LABS？根据不同的市场需求，针对常见的转基因表达蛋白均设计了特异性检测试纸条，并且推出了多合一检测试纸条。ROMER LABS？试纸条不需要其它辅助仪器即可进行现场检测，可使转基因检测更加简单、快捷。

免疫印迹法（Western Blotting）

免疫印迹法是通过抗体与抗原在固相膜上的特异结合来实现检测外源基因表达蛋白质的方法，这种蛋白质检测方法融合了蛋白质凝胶电泳以及印迹和免疫测定技术。首先通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳对蛋白质进行分离；然后把分离的蛋白转到固相膜上；再让蛋白与第一抗体、酶标的第二抗体杂交结合，然后根据第二抗体上的标记物的性质进行抗原的检测。

蛋白质芯片法

蛋白芯片技术的原理是对固相载体进行特殊的化学处理，在其表面固定高密度排列的蛋白质探针，根据蛋白质分子的特性，捕获能与之特异性结合的转基因蛋白，然后用CCD相机或激光扫描系统获取信息，最后用计算机进行定性定量分析。

核酸水平的檢测技术

转基因作物是通过插入外源基因片段来改变作物自身基因组从而获得一些优良性状，新转入的外源基因片段主要包括启动子、目的基因和终止子。因此，核酸水平的检测主要是对以上3种基因片段进行检测，常用的方法有Southern印记杂交法、聚合酶链式反应法、环介导等温扩增法、基因芯片法等。

Southern印记杂交法

该法通常先把分离出的样品DNA片段固定在硝化纤维或尼龙膜上，经干烤或紫外线照射固定，然后使用带有标记的核酸探针与样品DNA片段进行杂交，用放射自显影或酶反应显色来确定转基因的DNA片段含量。这种方法只是将探针与样品DNA进行杂交，没有样品DNA的扩增，所以与PCR检测方法相比，检测的灵敏度较低。

聚合酶链式反应法（PCR）

PCR扩增的原理与天然DNA复制过程十分相似，以DNA半保留复制为基础，在聚合酶的作用下对目的DNA片段进行体外快速扩增，使微量的DNA片段在短时间内得到指数级增长，对扩增后的基因片段进行凝胶电泳便可分析出是否含有转基因成分。

目前在PCR的基础上又发展出复合PCR、实时荧光PCR、数字PCR等检测方法，使转基因检测更加准确。但PCR需要专业性操作，且需要昂贵的仪器。

基因芯片法

基因芯片检测是基于DNA分子杂交的一种高通量检测方法，首先将提取的待测样品进行荧光标记，然后与基因芯片上已知序列的核酸探针进行杂交，对杂交反应后芯片上的荧光信号进行分析，以此实现对标记基因、启动子、终止子和目标基因的检测。

环介导等温扩增方法（LAMP）

LAMP方法与PCR方法相似，针对目标基因上的6个区域设计4条引物，利用链置换型DNA聚合酶在恒温条件下对目标基因进行扩增反应，对扩增产物进行分析即可判断是否含有转基因成分。

结语

近年来，转基因检测技术快速发展，除了以上介绍的技术外，还出现了一些新的检测技术，比如生物传感器分析技术、微阵列分析技术、色谱分析技术、近红外线光谱分析技术以及纳米检测技术等。在检测方面，各检测技术均有其优缺点，但毫无疑问，准确、快速将是检测技术未来的发展方向。在实际检测中，ROMER LABS？提供的转基因检测ELISA试剂盒以及免疫试纸条两种检测方法，可根据待检测样品以及检测环境的不同进行适当的选择，同时，选用多种方法联合使用也是目前转基因检测的一个趋势。