葛 婷，何晓杰，叶尔保勒，阿斯喀·夏热甫汉，雷程红*，王振宝,*

(1.新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐 830052；2.伊犁职业技术学院，新疆伊宁 835000；3.伊犁出入境检验检疫局，新疆伊宁 835000)

蜜蜂美洲幼虫腐臭病(American foulbrood of honeybees)是由幼虫芽胞杆菌(Paenibacilluslarvae)引起的蜜蜂幼虫和蛹的一种急性、毁灭性传染病。该病只感染蜜蜂幼虫[1]，患病蜜蜂幼虫最初会在体色上有明显变化，颜色由正常的珍珠白变为棕黄色、褐色甚至黑褐色，房盖由凸起变为凹陷，且潮湿色暗，感染后期的虫尸可被拉成2 cm～3 cm的细丝，伴有鱼腥臭味，最后紧贴于巢房壁，呈黑褐色难以清除的鳞片状物[2-4]。幼虫芽胞杆菌产生的芽胞有7层结构包围，具有极强的生命力，能抵抗热和化学物质，在高温干燥等恶劣环境下至少能存活35年。该病一旦发生，极易造成蜂群衰弱及蜂群死亡[5-6]。该病最初发生于英国，后来传到欧美各国，现遍布全世界。中国是养蜂大国，也是最大的蜂产品生产和出口国，该病对我国养蜂业的发展以及蜂产品质量已造成严重影响[7]。

幼虫芽胞杆菌主要致病因子是一些胞外分泌的蛋白酶，研究表明，这些蛋白酶为含锌的金属蛋白酶(Paenibacilluslarvaemetalloproteases，PLMP)，参与幼虫退化[8-11]。Karian A研究发现了完整的幼虫芽胞杆菌金属蛋白酶基因的开放阅读框，并根据该阅读框中完整的基因序列进行了金属蛋白酶重组表达载体的构建，获得了重组蛋白及鼠抗金属蛋白酶基因多克隆抗体[12]。本研究根据幼虫芽胞杆菌PLMP基因序列，设计特异性表达引物，克隆PLMP基因。……