安志远，赵攀峰，李 聃，周怀谷，郭育林

（1.上海公安学院，上海200137；2.上海市公安局物证鉴定中心 法医物证学现场应用技术公安部重点实验室上海市现场物证重点实验室，上海200083；3.无锡中德美联生物技术有限公司，江苏 无锡214174）

死亡时间（postmortem interval， PMI）的推断一直是法医学工作实践和科研攻关的一项重、难点课题。以往的PMI推断研究主要聚焦于个体死后尸体现象和尸体内源性物质变化规律，近年来微生物在尸体腐败过程中的作用成为了一项研究热点。大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）是人和动物肠道中的正常栖居菌，婴儿出生后即随哺乳进入肠道，与人终身相伴。在个体死后，大肠杆菌属于具有较强分解蛋白质能力的腐败菌种，且由于其周身鞭毛能运动，最易出现细菌移位（bacterial translocation， BT）[1-3]。故本实验对SD大鼠心血中大肠杆菌LacZ基因含量的检测方法及其随PMI变化的规律进行了一系列初步研究，探讨利用心血中LacZ基因含量推断PMI的可行性。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

EZ1 DNA Investigator Kit（美国 Promega 公司）；Taq DNA 聚合酶（5U/μl，Takara），10×BufferMg2+plus，dNTPs（2.5mM），pMD18-T vector Cloning Kit（宝生物工程（大连）有限公司）引物和Taqman探针（生工生物工程（上海）股份有限公司）；荧光定量PCR仪为ABIPISM-7900HT扩增系统；分光光度计（Thermo Scientific NanoDrop 2000c）；EZ1 Advanced XL（美国Promega公司）。

1.2 方法

1.2.1 大鼠心血DNA样本采集

18只健康SD大鼠，雌雄不限，体重180～200 g。控制室内环境温度25℃，适应性饲养3 d颈椎脱位法处死，按PMI随机分成9组，每组2只，其中1组对照组（死后 0 h），8 组实验组（PMI分别为：12、24、36、48、60、72、84、96 h），置于密闭室内，分别在各时间点取心血100μL，然后应用EZ1 Advanced XL按照EZ1 DNA Investigator Kit说明书进行操作提取心血DNA，最终每组得到DNA洗脱液100μL，-20℃冰冻保存备用。

1.2.2 菌种获取

E.coliDH-5α（无锡中德美联生物技术有限公司）。……