师 亮 陈 浩,2△ 崔慧林 张皓洁 郝跃亭

(1 山西医科大学组织学胚胎学教研室,太原 030001; 2 山西医学科学院,山西医科大学附属大医院,太原 030026)

肿瘤细胞诱导的血管新生是大多数恶性肿瘤生长和转移的前提[1]。越来越多的研究表明血管新生与多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)发生、发展、恶化及预后密切相关[2]。目前以反应停为代表的抗血管新生药物应用于难治复发性骨髓瘤的临床治疗,并取得较好疗效,提示以抗血管新生为靶点的治疗已成为治疗难治复发骨髓瘤重要着眼点。青蒿琥酯(artesunate,ART)是世界上广泛采用的抗疟药青蒿素的衍生物。本课题组前期研究表明青蒿琥酯具有明显抗骨髓瘤活性,能诱导骨髓瘤细胞凋亡、抑制骨髓瘤生长[3]。本实验继续研究青蒿琥酯在MM细胞促血管新生效应中的作用及其机制,寻找青蒿琥酯在MM治疗中的理论依据。

1 材料和方法

1．1 实验材料

青蒿琥酯由南药桂林有限公司提供,产品编号H10930195,临用前加5%NaHCO3注射液溶解。骨髓瘤RPMI-8226细胞由中科院上海细胞生物学研究所提供。蛋白提取试剂盒、BCA蛋白浓度检测试剂盒购于上海康成生物公司;全部抗体购于美国Santa Cruz公司。

1．2 MTT实验

人骨髓瘤RPMI-8226细胞用RPMI1640培养基培养于37℃二氧化碳培养箱。取对数生长期的人骨髓瘤RPMI-8226细胞,经胰酶消化后,调细胞浓度为2×105/ml,用96孔板接种,每孔加200μl细胞悬液。分别以终浓度为0、2.5、5、10、20、40μmol/L和80μmol/L的青蒿琥酯处理为实验组;加入等体积的DMSO为阴性对照。共计8个组,每组设3个复孔。培养24、48h后,MTT比色法测定。终止反应前4h,每孔加入5g/ml的MTT 20μl继续培养4h,小心吸去孔内液体,然后加入200μl DMSO,振荡使结晶物充分溶解,选择570nm波长,测定各孔光吸收值。……