亓丽红，黄 兵，吴家强，宋玲玲，王友令，马秀丽，于可响，刘 涛，艾 武，徐怀英

(山东省农业科学院 家禽研究所，山东 济南 250023)

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)引起鸡急性高度接触性传染病，以呼吸道症状、蛋种鸡产蛋量下降、蛋品质下降、肾脏病变及胃肠炎变化为主要特征，是目前危害国际养禽业的主要疾病之一。由于IBV血清型多，且新的血清型不断涌现，而各型间交叉保护率低，新的变异株不断出现，组织嗜性也多变，给诊断和防治带来一定困难[1-5]。

IBV含有3种结构蛋白，即纤突蛋白S、膜蛋白M和核衣壳蛋白N。N蛋白占病毒总蛋白量的40%，主要作用是包裹核酸，与病毒的复制有关[6]。N蛋白还能免疫识别相关靶位，在细胞免疫和体液免疫中起作用。在进化过程中N蛋白比S1蛋白相对保守，因此我们通过对N蛋白进行表达，以此作为群特异性诊断抗原，建立了检测不同IBV抗体水平的间接ELISA诊断试剂盒。自建试剂盒选择原核表达载体pET-32 a(+)构建重组表达质粒进行融合表达并纯化，解决了IBV全病毒纯化困难的问题。检测鸡传染性支气管炎病毒抗体的间接ELISA试剂盒，成本低廉、操作简便、快速，尤其适合批量样品的检测，大大提高了鸡传染性支气管炎血清学诊断的效率[7-10]。

1 材料与方法

1.1 病毒、试剂及药品

IBV-LC2、表达载体pET32 a、大肠杆菌BL21均为山东省农业科学院家禽研究所禽病诊断与免疫重点实验室保存。限制性内切酶SalⅠ、EcoRⅤ及Trizol RNA提取试剂购自TaKaRa公司；反转录酶(AMV)、RNA酶抑制剂及dNTP混合物购自Promage公司；酶标HRP-羊抗鸡IgG(工作浓度为1∶3 000)购自SouthernBiotech公司；……