一种快速鉴定杂交水稻种子纯度的方法
2018-05-21,,,,,
种子 2018年4期
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(安徽丰大种业股份有限公司, 合肥 231100)
种子质量是种子企业生存的根本,杂交种子纯度是种子质量检验的重要指标之一,也是企业购销种子的重要依据[1]。最准确的种子纯度鉴定方法是田间鉴定,但成本高,耗时长,特别是其检测结果滞后的缺点不能满足种子企业经营工作的需要[2]。近年来,随着分子标记的发展, SSR标记因其稳定、重复性好、多态性好等优点,被广泛应用于杂交水稻种子纯度的检验[3]。SSR标记是在DNA水平上的检测,因此不受环境影响,成本低廉,简单快速。
根据《农作物种子检验规程》(GB/T 3543.5—1995),在培养室或温室中,可以用100粒,2次重复。所以运用SSR标记进行杂交种子纯度检测的首要步骤是提取200粒单株的DNA,目前,DNA提取的方法一般为CTAB法和SDS法,这2种方法操作步骤繁琐,耗时长,且提取过程存在有害人体的物质[4],因此DNA的提取成为了SSR标记检测杂交种纯度的限速步骤。高效快速提取基因组DNA的技术在水稻中也有研究[5],但普遍认为其扩增效果不稳定,所以未在水稻杂交种纯度检测中普及[6]。本研究通过96孔PCR板快提法与CTAB法提取的DNA,分别进行PCR扩增检测,为大量检测杂交水稻种子纯度提供了一种高效简便的方法。
1 材料和方法
1.1 材 料
本试验所用的杂交水稻种子两优988及其双亲(R 988(♂)和富1 S(♀))均来自安徽丰大种业股份有限公司制种基地。所有试剂及引物均购自上海生物工程有限公司。
1.2 方 法
1.2.1 种子发芽
随机选取超过100粒杂交水稻种子和10粒双亲种子,放入2个小发芽盒,置于30 ℃恒温箱中,待幼苗长至3~5 cm时取样。……
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